一、豚鼠内耳蜗管的超微结构（论文文献综述）
周颖[1]（2019）在《GPER通过cAMP/PKA途径调节衰老血管纹周细胞上BKCa通道的研究》文中研究说明目的:以豚鼠耳蜗血管纹PCs为研究对象,探讨雌激素受体GPER对耳蜗PCs上BKCa的表达和功能的调节及其与年龄相关性听力损伤的关系。方法:动物实验:选取8周龄健康豚鼠随机分为Control组、D-半乳糖衰老模型组（D-galactose,D-gal）和D-gal+G1组。采用Morris水迷宫检测各组豚鼠行为的变化;用紫外分光光度法检测各组豚鼠不同组织中SOD活性和MDA含量;用听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）检测不同组豚鼠听力的变化;用免疫荧光技术检测血管纹PCs上BKCa和EPER表达的改变;用膜片钳技术检测GPER对PCs上BKCa电流的影响。细胞实验:在无菌条件下提取豚鼠血管纹周细胞进行培养,实验分为Control、D-gal、D-gal+G1、D-gal+G1+SQ22586和D-gal+G1+H89组。采用免疫荧光技术和Western技术检测GPER激动剂G-1对PCs上BKCa和cAMP/PKA表达的改变;用膜片钳技术检测GPER对PCs上BKCa电流的影响。结果:动物实验:（1）Morris水迷宫行为测试显示D-gal组豚鼠的空间学习能力和记忆有损伤;SOD活性和MDA含量检测结果显示D-gal组存在氧化应激损伤;（2）与Control组相比,D-gal组ABR阈值升高且Ⅰ波振幅明显降低（P<0.01）,D-gal+G1组较D-gal组相比,ABR阈值减低且Ⅰ波振幅升高（P<0.01）;（3）与Control组相比,D-gal组血管纹PCs上GPER表达明显减少（P<0.01）,D-gal+G1组较D-gal组相比没有差异;（4）与Control组相比,D-gal组血管纹PCs上BKCa表达明显减少（P<0.01）,G1干预后,血管纹PCs上BKCa表达升高;（5）与Control组相比,D-gal组血管纹PCs的电流密度和BKCa净电流均明显减小（P<0.01）,G1干预后,血管纹PCs的电流密度和BKCa净电流均增大（P<0.01）;细胞实验:（6）与Control组相比,D-gal组PCs上BKCa表达明显减少（P<0.01）,G1干预后,PCs上BKCa表达明显升高,但给予cAMP阻断剂（SQ22586）和PKA阻断剂（H89）后可以部分抑制G-1对PCs上BKCa表达的上调;（7）与Control组相比,D-gal组PCs的电流密度和BKCa净电流均明显减小（P<0.01）,D-gal+G1组较D-gal组相比,PCs的电流密度和BKCa净电流均增大（P<0.01）,但给予cAMP阻断剂（SQ22586）和PKA阻断剂（H89）后可以部分抑制了G-1对PCs上BKCa电流密度的上调。结论:GPER可能激活cAMP/PKA信号传导途径上调血管纹周细胞上BKCa表达和功能,从而发挥对年龄相关性听力损伤的保护作用。
胡海霞[2]（2017）在《Efr3a敲减减轻耳蜗螺旋神经元退化变性的研究》文中研究指明目的:探索Efr3a基因敲减能否减轻小鼠耳蜗螺旋神经元及耳蜗神经末梢的退化变性,并初步探索其作用机制。方法:首先以8-10周Efr3a基因敲减（Efr3a KD）及其同窝野生型（WT）小鼠为研究对象,采用卡那霉素联合呋塞米给药破坏其耳蜗毛细胞,取给药后不同时间点行ABR检测,应用耳蜗基底膜铺片免疫荧光染色及半薄切片甲苯胺蓝染色对两组小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经元（SGNs）及其神经末梢（ANFs）进行计数并比较,同时采用透射电镜观察SGNs及ANFs超微结构变化,测量SGN胞体面积、圆度以及胞质内脂褐素面积比例以比较两组小鼠SGN退化变性程度;以同龄Efr3a KD、Efr3a转基因（Efr3a OE）以及WT小鼠作为动物模型,ABR方法检测2,6,8,10,12,14月龄小鼠的听功能变化,分别采用免疫荧光染色及半薄切片计数比较三组小鼠6,10,14月龄耳蜗毛细胞及SGN密度的变化及差异。最后采用real time PCR,RT-PCR以及Western Blotting检测并比较成年Efr3a KD小鼠及同窝WT小鼠耳蜗内神经营养因子NGF、BDNF、NT-3及其受体Trk A、Tkr B、Trk C的表达量。结果:Efr3a基因敲减并未影响成年小鼠在各个频率的ABR阈值,在给药后5d,所有小鼠的听阈在各个频率均明显升高,在8k Hz及12k Hz,Efr3a KD小鼠的ABR阈值较WT小鼠低;给药后30d及60d时,Efr3a KD小鼠耳蜗SGNs及ANFs的损失程度较同窝WT小鼠明显为轻。随着给药后时间的延长,SGN核周体面积及圆度逐渐降低,胞质内脂褐素样物质面积比例逐渐增加。2月龄时,Efr3a KD、Efr3a OE以及WT小鼠ABR阈值无明显差异,至10及12月龄时,Efr3a KD小鼠ABR阈值明显低于WT及Efr3a OE小鼠;10月龄、14月龄时,Efr3a KD小鼠的SGN残存数和密度明显高于WT及Efr3a OE小鼠。分子生物学检测显示,神经营养因子BDNF、NT-3及Trk B在mRNA及蛋白表达水平均较同窝WT小鼠明显为高。结论:Efr3a基因敲减能减轻耳蜗螺旋神经元及其神经末梢的退化变性,其机制有可能与增高了一些神经营养因子及其受体的表达有关。
邓璐[3]（2016）在《电针耳穴对硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠听觉中枢蛋白质组的影响》文中提出目的:探讨硫酸卡那霉素慢性致聋后豚鼠听皮层蛋白质组的变化、电针耳穴对听皮层蛋白质组的影响及机制,以及抑制素和吞蛋白-A1在硫酸卡那霉素慢性致聋发生和发展过程中的作用及电针对其表达的影响和机制。方法:1、动物分组:耳廓反射正常、无耳毒性药物史成年杂色豚鼠105只,随机分为3组:对照组7只,硫酸卡那霉素模型组49只,硫酸卡那霉素+电针组49只。对照组:颈背部皮下注射生理盐水（500mg/kg.day）,每日一次,连续注射7天;硫酸卡那霉素模型组:颈背部皮下注射硫酸卡那霉素（500mg/kg.day）,每日一次,连续注射7天;根据标本采集时间不同,又分为第1、7、14、28、56、70和140天7组。硫酸卡那霉素+电针组:颈背部皮下注射硫酸卡那霉素（500mg/kg.day）,每只豚鼠注射结束30min后予以电针针刺翳风、听宫穴,每次15min,每日一次,连续治疗7天;根据电针后标本采集的时间不同,也分为第1、7、14、28、56、70和140天7组。2、听皮层蛋白质组图谱的建立及差异蛋白的选取及鉴定:对照组、硫酸卡那霉素模型1-140天7组、硫酸卡那霉素+电针1-140天7组分别提取听皮层蛋白后,用Bradford法测定蛋白质浓度,分组进行蛋白质双向电泳。电泳后进行考染,拍照后结合PDquest软件分析,筛选并切取其中21个表达差异明显的蛋白点,应用质谱技术进行检测,通过胶内酶解、抽提酶解肽段、Zip Tip脱盐、MALDI-TOF/TOF质谱测试、软件分析数据来鉴定蛋白质。3、听皮层及下丘抑制素和吞蛋白-A1表达的研究:采用蛋白质印迹方法测定对照组、硫酸卡那霉素模型1-140天7组、硫酸卡那霉素+电针1-140天7组豚鼠听皮层及下丘抑制素和吞蛋白-A1的表达。4、统计学方法:用SPSS20.0软件进行统计学分析,蛋白表达灰度值结果以平均值±标准差（x±s）表示,采用方差分析,P<0.05认为差异具有统计学意义,t检验比较组间差异。结果:1.灰度差异2倍以上差异表达蛋白斑点鉴定出的蛋白质分别是14-3-3蛋白、海马钙结合蛋白样蛋白1、视锥蛋白样蛋白1、γ-可溶性NSF附着蛋白、78k Da葡萄糖调节蛋白、ATP合酶α亚基、微管不稳定蛋白、角蛋白Ⅱ型细胞骨架1、钙结合蛋白、吞蛋白-A1、磷酸吡哆醛磷酸酶、血影蛋白、异质核核糖核蛋白C、肌酸激酶B型、角蛋白Ⅰ型细胞骨架10、热休克蛋白70同源物-3,抑制素和ZBTB32蛋白等18种蛋白质。2.听皮层组织中抑制素、吞蛋白-A1表达的变化:对照组听皮层抑制素表达的相对灰度为1.11±0.13,模型组的第1、7、14、28、56、70和140天的相对灰度分别为1.05±0.14、1.01±0.10、0.92±0.09、0.88±0.16、0.85±0.14、0.94±0.15、1.08±0.13;电针组第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.82±0.11、1.32±0.14、0.97±0.13、1.08±0.12、1.01±0.11、1.20±0.16、1.09±0.07。与对照组相比,模型组抑制素第14、28、56天表达降低（P<0.05）;与模型组比较,电针组第7、70天抑制素表达增高（P<0.05）。对照组听皮层吞蛋白-A1的表达为0.42±0.10,模型组的第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.64±0.02、0.44±0.04、0.58±0.10、52±0.03、0.45±0.04、0.42±0.02和0.42±0.04;电针组第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.56±0.06、0.47±0.04、0.46±0.02、0.42±0.06、0.35±0.02、0.43±0.06和0.43±0.06。与对照组相比,模型组第1、14天吞蛋白-A1表达增高（P<0.05）,与模型组比较,电针组中的第14、28、56天吞蛋白-A1表达降低（P<0.05）。方差分析硫酸卡那霉素对豚鼠听皮层抑制素表达的影响,F=2.185,P=0.075;电针对慢性致聋豚鼠豚鼠听皮层抑制素表达的影响,F=7.490,P<0.001。方差分析硫酸卡那霉素对豚鼠听皮层吞蛋白-A1表达的影响,F=12.823,P<0.001;电针对慢性致聋豚鼠豚鼠听皮层吞蛋白-A1表达的影响,F=6.421,P=0.001。3.下丘组织中抑制素、吞蛋白-A1表达的变化:对照组下丘的抑制素表达为1.29±0.07,模型组的第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.92±0.08、1.02±0.14、0.78±0.10、0.81±0.07、0.76±0.08、0.98±0.08、1.33±0.10;电针组第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为1.02±0.09、1.30±0.13、0.79±0.08、1.17±0.14、1.42±0.13、1.04±0.17、1.33±0.10。与对照组相比,模型组抑制素第1、7、14、28、56、70天表达降低（P<0.05）;与模型组比较,电针组第7、28、56天抑制素表达增高（P<0.05）。对照组下丘的吞蛋白-A1表达为0.95±0.05,模型组的第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.97±0.09、0.98±0.08、1.52±0.14、1.14±0.11、0.95±0.08、0.99±0.10、0.96±0.11;电针组第1、7、14、28、56、70和140天的表达分别为0.96±0.08、0.99±0.10、0.95±0.10、0.98±0.09、0.92±0.02、0.72±0.06、0.97±0.10。与对照组比较,模型组第14、28天表达增高（P<0.05）,与模型组比较,电针组第14、70天吞蛋白-A1表达降低（P<0.05）。方差分析硫酸卡那霉素对豚鼠下丘抑制素表达的影响,F=17.210,P<0.001;电针对慢性致聋豚鼠下丘抑制素表达的影响,F=12.544,P<0.001。方差分析硫酸卡那霉素对豚鼠下丘吞蛋白-A1表达的影响,F=15.679,P<0.001;电针对慢性致聋豚鼠下丘吞蛋白-A1表达的影响,F=5.476,P<0.05。结论:1.14-3-3蛋白等18种蛋白质可能参与了硫酸卡那霉素慢性致聋的发生和发展过程。电针听宫、翳风穴可能通过调整以上蛋白质的表达来影响硫酸卡那霉素慢性致聋的发生和发展。2.抑制素可能通过调控线粒体功能、ROS的产生以及神经元对伤害的易感性,参与硫酸卡那霉素慢性致聋的过程。电针耳穴可能通过增加抑制素的表达保护线粒体功能,降低ROS产生,促进听皮层和下丘的功能重塑。3.吞蛋白-A1可能通过参与突触囊泡的回收过程以及一系列信号传导通路的调节,参与硫酸卡那霉素慢性致聋的过程。电针耳穴可能通过降低吞蛋白-A1的表达,抑制JNK等信号转导途径的激活,促进听皮层和下丘功能的恢复与重建。
张巩[4]（2015）在《基于JNK信号通路探讨川芎嗪对庆大霉素耳肾毒性的干预作用及其机制》文中研究指明[目的]在分子水平上基于JNK信号通路探讨庆大霉素所致耳肾毒性的病理机制,阐述川芎嗪对庆大霉素耳肾毒性的防治作用,进一步丰富中医肾主耳理论基础及内在的本质。[方法]筛选健康、耳廓反射正常的白毛红目豚鼠48只,适应性喂养1周后随机分成4组:第一组庆大霉素（GM）造模组、川芎嗪干预（GM+TMP）组、川芎嗪（TMP）组和空白对照（NC）组,每组12只。GM组:肌注硫酸庆大霉素120mg·kg-1·d-1;GM+TMP组:肌注硫酸庆大霉素120 mg·kg-1·d-1及腹腔注射盐酸川芎嗪30mg·kg-1·d-1;TMP组:腹腔注射盐酸川芎嗪30mg.kg-1.d-1;空白对照组:肌注与GM组等量的生理盐水。每日根据体重调整给药剂量,所有组豚鼠均连续给药13天,每组豚鼠首次用药前1天及用药13天后均行客观听力测试,采用click ABR阈值测试来判断各实验组豚鼠的听力情况。测试结束后对各组豚鼠取血检测尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）水平,实验结束后所有豚鼠断头处死,收集耳蜗和肾脏组织,进行HE染色,在光镜下观察耳蜗和肾脏的病理变化。应用Western blot法检测耳蜗、肾脏组织JNK蛋白表达量,并进行相关性分析。[结果]1.听力检查结果:见表2、图1,实验结果示各组豚鼠用药前听阈无显着性差异（P>0.05）。用药后GM组的click ABR阈值显着性升高（54.64±23.72 dB nHL）,听力比空白对照组（8.17±5.33 dB nHL）有所下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;GM+TMP 组的 click ABR 阈值（28.17±26.54 dB nHL）虽有升高,听力依然较空白对照组差,差异具有统计学意义（P<0.05）,但比GM组低,差异具有统计学意义（P<0.05）:TMP组的click ABR阈值（7.83±4.49 dB nHL）与空白对照组相比,听力差异无统计学意义（P>0.05）。2.肾功能检测结果:见表3,图2,用药后GM组血清BUN、SCr值显着性升高,与空白对照组相比,差异具有统计学意义（p<0.05）;用药后GM+TMP组血清BUN、SCr显着下降,与用药后GM组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）,与空白对照组的血清BUN、SCr含量相比,差异不具有统计学意义（p>0.05）。TMP组的血清BUN、SCr值与空白对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。3.形态学检查结果:见附图23.1 GM组可见耳蜗Corti器毛细胞减少,有较多缺失,呈现水肿状态,螺旋神经节细胞间隙增大,有空泡变性;GM+TMP组耳蜗Corti器毛细胞散在缺失,呈现空泡状,螺旋神经节细胞形态结构有不同程度病理改变,细胞数量有所减少,但较造模组损伤轻;TMP组和空白对照组耳蜗Corti器毛细胞及螺旋神经节细胞形态正常,细胞排列相对密集;3.2 GM组可见肾小球萎缩,肾小管出现炎症细胞浸润、排列不规则,细胞肿胀、变性坏死,肾间质出血;GM+TMP组肾脏小管上皮细胞出现轻微肿胀、变性;TMP组和空白对照组肾脏小管、肾小球、间质无特殊性改变;4.Western blot法检测结果4.1耳蜗JNK蛋白表达:用药后GM组JNK2、p-JNK2蛋白表达量及与GM+TMP组、空白对照组相比,均具有统计学差异（P<0.05）,JNK2、p-JNK2蛋白表达量增加;GM+TMP组JNK2、p-JNK2蛋白表达量与空白对照组相比,不具有统计学差异（P>0.05）;TMP组JNK2、p-JNK2蛋白表达量与空白对照组相比,不具有统计学差异（P>0.05）,提示川芎嗪可抑制JNK2蛋白的表达,抑制JNK2的磷酸化;且用药后各组间JNK1、p-JNK1蛋白表达量之间比较均无统计学意义（P>0.05）;表明了 JNK2蛋白在GM致聋和TMP抑制中起到了关键性作用。且豚鼠耳蜗JNK2、p-JNK2蛋白表达量与click ABR阈值具有明显的线性相关趋势（r=0.83,r=0.92,P<0.05）。4.2肾脏JNK蛋白表达:用药后GM组JNK2蛋白表达量与GM+TMP组、TMP组、空白对照组相比,均具有统计学差异（P<0.05）,JNK2表达量增加;GM+TMP组JNK2蛋白表达量与TMP组、空白对照组相比,均具有统计学差异（P<0.05）,JNK2表达量增加,且小于GM组的表达量;TMP组蛋白表达量与空白对照组相比,不具有统计学差异（P>0.05）。提示川芎嗪可抑制JNK2蛋白的表达;GM组和GM+TMP组的JNK1蛋白表达量与空白组以及TMP组相比,均具有统计学意义（P<0.05）,GM组和GM+TMP组的JNK1表达量减小。且豚鼠肾脏JNK2蛋白表达量与血清BUN、SCr值具有明显的线性相关趋势（r=0.83,r=0.77,P<0.05）。5.耳肾JNK蛋白表达量的相关性分析:耳、肾在JNK2和总JNK蛋白表达水平上呈正相关（r=0.74,r=0.71）,具备明显的线性相关趋势（p<0.05）。且耳、肾在JNK1蛋白表达水平上无相关性,不具备直线相关趋势（p>0.05）。提示JNK2可能作为耳肾互相关联的分子信号基础。[结论]1.给豚鼠肌注射硫酸庆大霉素,可建立耳聋和肾功能损伤的模型,JNK信号通路可能反映了庆大霉素所致耳肾功能损害程度的重要因子之一,JNK信号通路激活,大量JNK蛋白表达。2.川芎嗪可有效防治庆大霉素的耳肾毒性作用,保护听力和肾功能,川芎嗪可能通过JNK信号通路干预庆大霉素所致耳肾功能的损害程度,JNK信号通路被抑制,JNK蛋白表达量降低。3.本实验中耳肾具有相同的病理及干预过程,JNK信号通路可能是耳肾互相关联的指标之一,特别是JNK2蛋白,可能是中医“肾主耳”的分子基础之一。
李胜利,朱宏亮,刘全征,王玮,刘艳平,史士合,李德,王福田[5]（2013）在《复聪汤对工业噪声致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的研究》文中提出本研究用复聪汤对工业噪声致感音神经性耳聋动物进行治疗,观察其对听神经和耳蜗毛细胞的修复再生作用效果。方法:54只健康青年豚鼠听力学检查后,42只动物给予工业噪声（96-102dB SPL）10d暴露致聋,动物致聋后随机分成两组,噪声治疗组22只用纯中药制剂给予"复聪汤Ⅰ号"口服液和"复聪汤Ⅱ号"滴耳液治疗;噪声对照组20只给予同样方法口服0.9%氯化钠溶液,另有12只为正常对照组。在治疗30,60和90d后测定实验动物的听功能脑干诱发电位（ABR）,畸变耳声发射（DPOAE）后,每组处死6只动物,耳蜗左侧扫描电镜观察,右侧耳蜗铺片行光镜观察和毛细胞计数。结果:实验前ABR和DPOAE测定所有受试豚鼠的听功能正常;在连续10d工业噪声暴露后,豚鼠ABR反应阈值上升到40到60 dBSPL,DPOAE幅值降低。电镜观察可见耳蜗毛细胞静纤毛折断、散乱和融合,以及中回毛细胞的损害消失;在用复聪汤口服和耳浴治疗30d后,80%的治疗组豚鼠ABR反应阈值恢复到30到40 dBSPL,DPOAE幅值有较明显提高;耳蜗铺片和电镜观察显示耳聋豚鼠的耳蜗毛细胞数目有一定恢复,组织结构有修复现象,电镜可见再生毛细胞仅出现少量纤毛,而未治疗噪声对照组未发现此种现象;治疗60d时,耳蜗毛细胞数目明显增多,Corti器的毛细胞区,有大量的增殖细胞出现,扫描电镜可见成小束的新生纤毛出现在毛细胞缺失部位,同时支持细胞大量增殖;到治疗90d时,再生的静纤毛束已基本形成,尤其是耳蜗基底部位的毛细胞明显增多,听功能已基本正常。结论:复聪汤对听力损失豚鼠耳蜗毛细胞有一定的修复和再生作用。
侯赟,郭维维,杨仕明,张小兵[6]（2012）在《耳蜗血管纹的发育及异常所导致的耳聋疾病》文中指出血管纹位于耳蜗中阶外侧壁,是维持耳蜗内环境稳定和内淋巴电位的器官。随着人们对血管纹的认识有了不断的更新和发展,对与血管纹相关的疾病也有了进一步的认识。研究血管纹胚胎发育及出生后的发育变化,对提高血管纹及其相关耳聋疾病的认识具有重要的意义。本文主要综述血管纹发育及其相关耳聋疾病研究的主要方面及其研究进展。
李胜利,赵谦,任田英,张少强,闫利英,刘思伟,王婉莹,朱宏亮[7]（2011）在《回声定位蝙蝠耳蜗听黄斑区毛细胞形态研究》文中提出目的观察蝙蝠耳蜗听黄斑毛细胞的特化形态结构,以探讨听黄斑区毛细胞对蝙蝠回声定位回声频率的敏锐调谐、放大和频率选择的作用。方法选用听力正常的蹄蝠（22只）、菊头蝠（64只）和犬吻蝠（10只）,分别检测其ABR各频率反应阈,对耳蜗基底膜毛细胞进行扫描电镜和透射电镜观察。结果三种蝙蝠ABR反应阈值除最佳频率外,均在35 dB SPL以上,菊头蝠、蹄蝠、犬吻蝠反应幅值最大及最敏锐调谐频率分别为83～86、60～62、20～28 kHz。回声定位蝙蝠耳蜗听黄斑区外毛细胞胞体（OHC）呈纺锤形或烧瓶形,明显不同于非回声定位哺乳动物的长圆柱形外毛细胞形态。结论回声定位蝙蝠耳蜗听黄斑OHC的形态特化特征支持其OHC作为耳蜗阻尼机制的结论,OHC的这种形态特化与其他耳蜗微机械结构的匹配有利于耳蜗前行波的传导。
钟翠萍[8]（2010）在《c-Myc及CyclinA2基因诱导大鼠耳蜗前体细胞增殖的体外研究》文中进行了进一步梳理在成年哺乳动物耳蜗中,听觉毛细胞和神经元损伤后不能再生,这成为感音神经性聋难以治愈的主要原因。近年来,自新生鼠耳蜗分离出前体细胞,在体外可定向分化为表达毛细胞和螺旋神经元表型的细胞。我们在体外比较了P1、P7和P14的大鼠耳蜗前体细胞的数量、增殖能力及超微结构,结果表明出生后耳蜗前体细胞大部分处于细胞周期的静止期,并逐步通过分化和凋亡彻底地退出了细胞周期,耳蜗前体细胞也并非真正意义上的干细胞,而是处于干细胞与成熟子代细胞之间的中间细胞或是处于干细胞未端的细胞。通过实验发现c-Myc可能参与调控耳蜗的发育以及前体细胞的增殖、分化。结合之前的工作基础,我们利用腺病毒技术将c-Myc和cyclin A2共转染至新生鼠耳蜗前体细胞,可使其增殖,并促进前体细胞重新进入细胞周期。初步研究其调控机制,表明为经典的CKI-cyclin-CDK途径。实验一大鼠耳蜗前体细胞的分离、培养目的对新生大鼠耳蜗前体细胞进行分离、培养。方法从P7大鼠耳蜗中分离、培养前体细胞,用免疫细胞化学的方法对前体细胞进行鉴定;血清诱导分化后鉴定分化潜能,进一步了解其多向分化特性。结果原代培养的细胞,培养1天后即可见“细胞球”,随着培养天数的增加,可见细胞球体积增大,所含细胞增多;培养5天后,少部分细胞球内的细胞出现分化及贴壁现象。细胞球内大部分细胞呈nestin、musashi1和BrdU阳性,表明其具有自我更新及有丝分裂的能力。细胞球经诱导分化14 d后,对分化细胞行免疫细胞化学鉴定,发现分化细胞表达毛细胞标志物myosin VIIA和phalloidin,表达成熟神经元标志物NeuN,表达不成熟神经元标志物Tuj1,表达星形胶质细胞标志物GFAP,表达少突胶质细胞标志物galactocerebroside,以及谷氨酸能神经元标志物GluR-1,证明其具有多向分化潜能。结论本部分实验为研究耳蜗前体细胞成年后“沉默”的机制奠定基础,为研究通过基因治疗的方法促进前体细胞增殖提供了一种体外模型。实验二不同日龄大鼠耳蜗前体细胞增殖能力及超微结构的比较目的耳蜗前体细胞在成年后沉默或消失的具体机制尚不清楚,为探讨其原因,我们在体外比较了P1、P7和P14的大鼠耳蜗前体细胞的数量、增殖能力及超微结构,观察耳蜗前体细胞的转归。方法对P1、P7和P14分离出的耳蜗前体细胞,经体外培养7天后进行计数,检测其数量变化,并每隔5天传代观察传代数;采用流式细胞技术检测细胞周期,来评估不同日龄新生大鼠耳蜗前体细胞增殖能力的变化;应用透射电镜观察不同日龄新生大鼠耳蜗前体细胞的超微结构。结果出生1周后耳蜗前体细胞的数量急剧下降,出生2周后的耳蜗内未能分离出前体细胞;P7前体细胞的传代数较P1减少;P7较P1更多的前体细胞处于有丝分裂的静止期,增殖指数下降;P7的前体细胞超微结构中有更多分化细胞的特点。结论耳蜗前体细胞出生后大部分处于细胞周期的静止期,并逐步通过分化和凋亡彻底地退出了细胞周期,他们并非真正意义上的干细胞,而是处于干细胞与成熟子代细胞之间的中间细胞或是处于干细胞未端的细胞。实验三c-Myc在大鼠耳蜗组织发育和耳蜗前体细胞分化过程中的表达变化目的原癌基因c-Myc具有调控G0/G1转换和去分化的双重作用。目前对于c-Myc在内耳中的功能尚未见报道。我们拟通过检测c-Myc在大鼠耳蜗组织发育及前体细胞分化过程中的表达情况,探讨其在哺乳动物耳蜗发育中的作用。方法1、取E10、E15、P1、P7和P14的SD大鼠耳蜗组织,应用RT-PCR、Western blot的方法检测c-Myc在大鼠耳蜗组织发育过程中的表达情况。2、取耳蜗前体细胞和分化7天后的分化细胞,用RT-PCR、免疫细胞化学染色和Western blot的方法检测c-Myc在耳蜗前体细胞分化过程中的表达情况。结果从胚胎至出生后的耳蜗发育过程中,c-Myc表达量呈现逐渐下降趋势;在前体细胞的分化过程中c-Myc的表达量也呈现下降。结论c-Myc的表达量在大鼠耳蜗组织发育及耳蜗前体细胞分化的过程中逐渐下降,这表明c-Myc可能参与调控大鼠耳蜗组织的发育及前体细胞的分化。实验四Ad-c-Myc-EGFP和Ad-CyclinA2-EGFP的构建和转染耳蜗前体细胞的浓度确定目的构建目的基因分别为c-Myc和CyclinA2的腺病毒载体,体外转染大鼠耳蜗前体细胞,观察转染效率及细胞活性,确定适当的转染浓度。方法1、构建复制缺陷重组腺病毒: Ad-CyclinA2-EGFP、Ad-c-Myc-EGFP及Ad-EGFP;2、在不同效靶比浓度下（MOI=50、100、150、200、250）,Ad-EGFP转染耳蜗前体细胞,观察不同浓度转染时细胞形态变化,荧光显微镜观察EGFP表达情况,计算阳性细胞百分率;3、应用MTT观察细胞活性确定增殖点;4、确定MOI值,应用流式细胞仪检测转染效率。结果毒种上清液经PCR鉴定,能够特异地扩增出预期大小的条带,证明该重组腺病毒携带目的片段。在不同效靶比浓度下,EGFP阳性细胞百分率随MOI值的升高而增大;当MOI=50,100,150时重组腺病毒对细胞的毒性作用与对照组相比无显着差异;当MOI值=200时,细胞状态不佳,出现生长抑制。根据光镜下细胞形态学证据,确定本实验采用MOI值为150。经MTT法测定,细胞生长曲线呈S形,转染后36小时做为增殖点,应用流式细胞技术检测转染效率为25.2%。结论复制缺陷型腺病毒可有效转染原代培养的耳蜗前体细胞,为进一步研究c-Myc和CyclinA2基因对耳蜗前体细胞增殖能力的影响奠定了基础。实验五c-Myc、CyclinA2基因对耳蜗前体细胞增殖能力的影响目的耳蜗前体细胞在体外具有一定的增殖能力,可定向分化为表达毛细胞和神经元表型的细胞,但耳蜗前体细胞增殖能力差,并处于细胞周期的“静止”状态。我们用编码目的基因为c-Myc和CyclinA2的腺病毒表达载体转染耳蜗前体细胞,促进其增殖并重返细胞周期,从而为诱导耳蜗受损细胞再生提供新的思路和依据。方法分别设立Ad-CyclinA2-EGFP转染组、Ad-c-Myc-EGFP转染组、Ad-EGFP转染组及Ad-CyclinA2-EGFP、Ad-c-Myc-EGFP共转染组;用复制缺陷腺病毒转染大鼠耳蜗前体细胞,MOI值为150,用流式细胞技术检测c-Myc和CyclinA2基因对耳蜗前体细胞周期的影响;BrdU孵育观察转染后有丝分裂能力的变化;观察各组传代能力变化,采用方差分析对数据进行统计学处理。结果流式结果表明Ad-CyclinA2-EGFP转染组、Ad-c-Myc-EGFP转染组、Ad-EGFP转染组对耳蜗前体细胞周期无明显影响;而Ad-CyclinA2-EGFP、Ad-c-Myc-EGFP共转染组可使部分耳蜗前体细胞进入G1/S期和G2/M期,共转染组与对照组G0/G1期细胞比例分别为62.03±2.02%、78.27±6.09%（P﹤0.05）;增殖指数分别为37.97±2.015、20.41±7.16（P﹤0.05）。共转染组中共表达绿色荧光（EGFP）、红色荧光（BrdU阳性）及蓝色荧光（Hoechst）的细胞球数量增多,表明共转染c-Myc、CyclinA2使更多的耳蜗前体细胞具有有丝分裂的能力;各组间传代能力无明显变化。结论c-Myc基因和CyclinA2基因单独作用于耳蜗前体细胞,在体外对细胞增殖与细胞周期无明显影响。而c-Myc和CyclinA2基因共同作用于耳蜗前体细胞,可促进细胞增殖,使部分前体细胞重返细胞周期。实验六c-Myc与CyclinA2基因促进耳蜗前体细胞增殖的作用机制目的研究c-Myc和CyclinA2基因共同转染耳蜗前体细胞后,检测目的基因表达情况以及促进细胞增殖的机制。方法应用real-time PCR和Western blot的方法观察转染Ad-EGFP与共转染Ad-CyclinA2-EGFP、Ad-c-Myc-EGFP时目的基因、PCNA、CDK2以及P27KIP1在细胞中的表达水平变化。结果real-time PCR和Western blot结果证实携带目的基因的腺病毒转染耳蜗前体细胞后能有效表达出相应的mRNA和蛋白;并可升高PCNA与CDK2的表达水平,降低P27KIP1的表达水平。结论复制缺陷型腺病毒可有效介导c-Myc和CyclinA2基因转染原代培养的耳蜗前体细胞,并通过上调细胞周期蛋白依赖激酶CDK2,下调CDK抑制蛋白P27KIP1,进而上调细胞DNA合成期标志蛋白PCNA来实现耳蜗前体细胞增殖的作用,其作用机制为经典的CKI-cyclin-CDK途径。
杨琳[9]（2009）在《镫骨、耳蜗及其Corti器的建模与生物力学研究》文中认为在内耳Corti器的组织弹性参数测量方法研究中,应用原子力显微镜（AtomicForce Microscopy,AFM）,采用液相接触式测量法,对新鲜未固定处理的基底膜进行测量,获取了6个不同部位的力曲线。按Hooke’s定律、参考Jan Domke算法,分析了在基底膜上相当于Hensen细胞、外毛细胞、柱细胞、内毛细胞、内指细胞、盖膜等不同部位的弹性参数分布特征。结果表明,基底膜径向排列的组织结构不同,杨氏模量存在明显差异。在整块基底膜标本上测量Corti器各结构的杨氏模量更能准确地反映它们在生理状态下的弹性特征。AFM测量方法可为Corti器有限元建模分析提供准确的材料弹性参数。采用Micro-CT成像技术对中耳和内耳进行高分辨率扫描,获得高精度的显微结构三维数据,构建了人镫骨、耳蜗及豚鼠耳蜗的三维模型。经过数据转换,导入有限元软件,能够满足镫骨及耳蜗三维形态学分析及其生物力学分析的需要。同时,以Corti器电镜图像为参照标准,在3Ds MAX软件支持下,结合多种高级建模方式,创建了Corti器的三维数字模型,精确再现了Corti器的复杂三维结构及各结构之间的空间位置关系,为进一步建立其力学模型打下基础。在数值模拟分析中,首先运用固体力学的有限元分析手段,对镫骨固有运动模式进行模态分析,并通过LDV振动实验验证了前6阶的模态频率。应用流体力学有限元分析手段,对二种简化的耳蜗模型的流场进行了分析与对比,结果表明,二种流场的速度分布及压力分布明显不同。对二维Corti器做必要合理的简化和假设后,初步进行了淋巴液所引起Corti器静态及动态响应的数值模拟。结果表明基底膜振动时Corti器弓状带与梳状带中部明显变形,可引起毛细胞上静纤毛偏斜,Corti器整体绕内柱细胞基部发生旋转。在盖膜与内毛细胞静纤毛的相互接触关系中,探讨了Corti器振动过程中盖膜与内毛细胞静纤毛的相互作用的力学行为。以豚鼠耳蜗底回Corti器的电镜图像为原型,建立盖膜与内毛细胞最长静纤毛接触和不接触的二种计算模型各一个,进行了静力学分析比较。模拟Corti器振动过程时,加载了相同的近似剪切流的梯度压力作用,结果表明,静纤毛表现出在不接触盖膜时偏移度较大;二种模型均显示在静纤毛顶连接（TipLink,TL）及小根（Rootlet）基部应力较高、整体模态频率近似。这提示静纤毛在不与盖膜直接接触时更容易受兴奋性刺激。本研究还从三维有限元模型数值模拟中,分析了不同外毛细胞静纤毛开角的差异。第一排开角最大、顺应性好并易偏斜;第三排开角最小、弯曲刚度最大,不易偏斜。这些研究进一步阐明了声波作用于内耳Corti器微观结构可能引起的生理效应。本研究探讨了几种不同的耳蜗、Corti器等结构建模方法及其弹性参数测量方法。从二维角度用有限元法分析了基底膜Corti器的振动特性及毛细胞与盖膜之间的作用关系。基底膜运动时,Corti器绕内柱基部旋转,盖膜与内毛细胞最长静纤毛不直接连接可能更符合生理状态。在三维模拟中,分析了不同耳蜗简化管形的流场及外毛细胞静纤毛受力状态。三排静纤毛不同开角表现出不同弯曲特性,这有可能是第一排静纤毛容易发生转位的原因。上述研究结果,有助于进一步认识生理状态下镫骨、Corti器的力学行为,为内耳感音机制的研究提供一个新的研究平台,对听觉器官的微观生物力学研究方法也是一项有意义的探索。
薛涛[10]（2008）在《新生大鼠脑干耳蜗核存在神经前体细胞的初步证据》文中研究指明感音神经性聋是临床常见病和多发病,严重影响患者的生活质量,临床上尚无理想的治疗方法。目前关于感音神经性聋的防治研究已成为听力学和耳科学研究的热点和难点之一。近年来,运用胚胎或神经干细胞（neural stem cells,NSCs）以及（neural progenitor cells,NPCs）的替代治疗应运而生,并受到密切的关注。目前大量的研究致力于干细胞/前体细胞移植促进听觉功能恢复,研究方向主要集中于外源性NSCs的直接或定向诱导后移植,或者将NSCs作为外源性基因的载体进行移植。虽然国内外学者在此方面已经进行了很多工作,取得了一定的进展,但仍有很多难题亟待解决。其关键问题之一是:对于NSCs/NPCs在听功能的形成与发育过程中的作用,尤其是听觉中枢神经核团内是否存在多向分化潜能的NSCs/NPCs还不甚清楚。实验一:新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的分离、培养目的:目前听觉系统是否存在NSCs/NPCs的研究主要集中在内耳感受神经元的干细胞/前体细胞上,近年研究证实哺乳动物内耳中存在着一定数量毛细胞的前体细胞,而听觉中枢神经核团内是否存在多向分化潜能的NSCs/NPCs目前尚未见报道。本研究拟分离、培养新生大鼠脑干耳蜗核NPCs,观察其增殖及传代特性,建立新生大鼠脑干耳蜗核NPCs的培养方法,为进一步研究打下基础。方法:P1、P3、P5、P7、P9、P11以及成年SD成年大鼠麻醉后,75%酒精消毒,无菌条件下开颅切取脑干耳蜗核,经剪碎、消化、离心、洗涤、吹打、过滤、计数,接种于无血清培养液DMEM/F12 （1∶1）培养,内含B27 （1∶50）、100 U/ ml青霉素、100μg/ml链霉素、20ng/ml EGF、20ng/mlbFGF,置于5 % CO2培养箱（37℃）内培养。细胞每5～7 d传代1次。取次代神经球离心后消化,吹打成单细胞悬液,通过“有限稀释法”获得从一个单细胞克隆扩增出的大量均质的脑干耳蜗核“神经前体细胞”。采取免疫荧光、免疫组织化学的方法,对NSCs/NPCs的特异性标记物Nestin、Musashi1的表达进行鉴定;通过台盼蓝染色技术检测不同日龄组细胞活力;CCK-8法绘制不同日龄组生长曲线,观察不同生长因子对于细胞增殖的影响。结果:新生5-7日龄大鼠脑干耳蜗核可以分离培养“神经前体细胞”,体外培养可以形成神经球,并保持旺盛的增殖活力,可持续传代100代以上;这些细胞经稀释纯化、传代后可以继续形成细胞克隆。细胞克隆呈nestin、musashil1免疫反应阳性;5-7日龄大鼠脑干耳蜗核中“神经前体细胞”数量较多,增殖能力旺盛,而在小于5日龄与大于9日龄大鼠中该细胞数量很少,而且增殖能力差,很难连续传代。表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）联合应用可以明显促进耳蜗核中的“神经前体细胞”的传代、增殖。结论:从新生5-7日龄大鼠脑干耳蜗核可以分离、培养出具有长期自我更新、维持自身数量稳定、保持未分化状态进行传代分裂增殖的具有部分NSCs特性的“神经前体细胞”。实验二:新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞体外分化特性的对比研究目的:在实验一中,我们在新生5-7日大鼠的脑干耳蜗核中分离出了具有体外连续传代增殖能力的“神经前体细胞”,这些细胞体外培养可以形成神经球,并表达NSCs/NPCs的特异性抗体,但还没有证实其是否存在NSCs/NPCs的另一个重要的特性——多向分化潜能。本实验拟通过免疫组织化学、免疫荧光、分子生物学的方法,验证该细胞的体外多向分化能力,观察分析其分化特性,并比较其与嗅球NSCs、嗅上皮NSCs分化特性的差异。方法:三种细胞分别取材培养,进行体外诱导分化后免疫细胞化学、免疫荧光化学以及分子生物学的鉴定;进行细胞的BrdU的体外标记,观察增殖与分化情况。结果:我们的实验结果提示大部分细胞分化为NeuN免疫反应阳性的神经元和GFAP免疫反应阳性的星形胶质细胞,少部分细胞分化为GalC免疫反应阳性的少突胶质细胞;标记后大部分细胞均为BrdU阳性,表明其处于增殖期,通过对三种来源细胞BrdU阳性率的比较可以发现,嗅球来源与耳蜗核来源的细胞BrdU的阳性率相近,均高于嗅上皮来源的NSCs。这可能由于不同脑区的发育特性导致其干细胞增殖能力不同。结论:新生大鼠脑干耳蜗核中的这种“神经前体细胞”具有了体外多向分化的潜能。实验三:新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的超微结构研究目的:了解大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”的超微结构、细胞之间的联系以及细胞的增殖和发育状态,有助于阐明该细胞在体外培养条件下的生长、发育和分化等生物学行为,为该细胞的研究和应用奠定基础。方法:本研究在成功分离、培养新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”的基础上,应用扫描及透射电子显微镜观察新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”的超微结构,进一步研究新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”的生物学特征,以期为更深层次的研究和应用提供依据。结果:体外培养的NSCs呈圆形或椭圆形,表面有微突起或微绒毛,细胞核浆比例高,稀少的细胞浆中有多少不等的未成熟线粒体、核糖体及高尔基复合体。不同培养时期的神经球内未分化NSCs的结构大致相同,均有分裂增殖细胞及少数凋亡细胞。分化后细胞伸出树突、轴突样结构,相邻细胞之间有突触样组织。结论:电镜提示耳蜗核“神经前体细胞”具有原始细胞的形态和结构,分化后的细胞均有神经细胞的形态学特点。实验四大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的冻存与复苏目的:NSCs在神经组织中含量少,获取大量纯化NSCs是研究工作的基础。NSCs在体外的合理冻存与复苏及无损保存是NSCs研究的关键。建立一种能够长期储存并维持NSCs生物学特性的方法对促进神经科学的基础和临床移植的研究具有重要的意义。方法:我们应用不同冻存保护液对新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”进行冻存,研究低温冻存对该细胞的增殖及多向分化潜能的影响,并以胚胎大鼠嗅球神经干细胞作为对照进行研究,分析冻存与复苏对于新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”生物学特性的影响。结果:采取正确的冻存与复苏方法,对新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”的生物学特性无影响。结论:新生大鼠脑干耳蜗核“神经前体细胞”经低温长期冻存,复苏后对于该细胞的基本生物学特性没有明显影响,可以长期低温冻存。
二、豚鼠内耳蜗管的超微结构（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、豚鼠内耳蜗管的超微结构（论文提纲范文）
（1）GPER通过cAMP/PKA途径调节衰老血管纹周细胞上BKCa通道的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 主要实验试剂的配制 |
| 2.2 D-gal诱导豚鼠衰老模型的制备和验证 |
| 2.3 D-gal诱导原代血管纹周细胞衰老模型的制备和验证 |
| 2.4 听性脑干反应(ABR)检测 |
| 2.5 免疫荧光技术检测D-半乳糖诱导衰老周细胞上GPER和 β-BK_(Ca) |
| 2.6 Western blot技术检测D-半乳糖诱导衰老周细胞上β-BK_(Ca)蛋白的表达 |
| 2.7 酶免疫测定检测周细胞中cAMP的含量 |
| 2.8 全细胞膜片钳技术检测D-半乳糖诱导衰老周细胞上BK_(Ca)的功能 |
| 2.9 统计学分析 |
| 实验结果 |
| 第一部分：在体实验结果 |
| 1.1 Morris水迷宫行为测试实验结果 |
| 1.2 MDA含量和SOD活性的检测结果 |
| 1.3 听性脑干反应(ABR)检测结果 |
| 1.4 免疫荧光技术观察雌激素受体GPER在衰老豚鼠血管纹PCs上的表达 |
| 1.5 免疫荧光观察G-1 对衰老豚鼠血管纹PCs上 β-BK_(Ca)表达和分布的影响 |
| 1.6 全细胞膜片钳检测G-1 对衰老豚鼠血管纹PCs上 BK_(Ca)通道功能的影响 |
| 第二部分：原代培养细胞实验结果 |
| 2.1 豚鼠耳蜗血管纹周细胞的培养与鉴定 |
| 2.2 D-gal诱导原代培养周细胞衰老 |
| 2.3 GPER可通过cAMP/PKA信号传导途径上调衰老模型周细胞上β-BK_(Ca)的蛋白表达 |
| 2.4 GPER可通过cAMP/PKA信号传导途径上调衰老模型周细胞上β-BK_(Ca)的表达 |
| 2.5 GPER可通过cAMP/PKA信号传导途径增强衰老模型周细胞上BK_(Ca)的电流 |
| 讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文 导师评阅表 |
（2）Efr3a敲减减轻耳蜗螺旋神经元退化变性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 绪论 |
| 第一部分 :Efr3a基因敲减小鼠感音性耳聋动物模型的构建 |
| 1 引言 |
| 2 仪器与材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第二部分 :Efr3a基因敲减能减轻耳蜗毛细胞破坏后诱发的螺旋神经元及耳蜗神经末梢的退化变性 |
| 1 引言 |
| 2 仪器与材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第三部分 :Efr3a基因敲减能减轻老年性耳聋小鼠耳蜗螺旋神经元的退化变性 |
| 1 引言 |
| 2 仪器与材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第四部分 :Efr3a基因敲减减轻小鼠螺旋神经元及耳蜗神经末梢退化变性的作用机制 |
| 1 引言 |
| 2.仪器与材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 耳蜗螺旋神经元退化变性机制的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（3）电针耳穴对硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠听觉中枢蛋白质组的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 氨基糖苷类抗生素临床应用及耳毒性预防的研究进展（综述） |
| 参考文献 |
（4）基于JNK信号通路探讨川芎嗪对庆大霉素耳肾毒性的干预作用及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 一. 实验材料与方法 |
| (一.) 实验材料 |
| (二.) 实验方法 |
| (三.) 观察指标 |
| (四.) 统计学方法 |
| 二. 结果 |
| (一.) 用药前后各组豚鼠的一般表现 |
| (二.) 各组豚鼠听力测试结果 |
| (三.) 各组豚鼠形态学检测结果 |
| (四.) 各组豚鼠血清BUN、SCr检测结果 |
| (五.) 蛋白印迹(Western blot)检测结果 |
| (六.) 相关性分析结果 |
| 三. 分析与讨论 |
| (一.) 理论依据 |
| 1. 肾主耳 |
| 2. 选药依据 |
| (二.) 结果讨论分析 |
| 1. 庆大霉素造听力障碍和肾功能损伤模型 |
| 2. 川芎嗪防治庆大霉素耳肾毒性作用机理 |
| 3. MAPK信号通路中JNK蛋白结果分析 |
| 4. JNK分子信号通路与肾主耳相关性 |
| 四. 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
（5）复聪汤对工业噪声致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的研究（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1. 动物、分组及造模方法 |
| 2. 治疗方法 |
| 3. 检测指标 |
| 3.1 听功能测定方法 |
| 3.2 耳蜗铺片及观察方法 |
| 3.3 扫描电镜观察方法 |
| 4. 统计学方法 |
| 结果 |
| 1.DPOAE测定结果 |
| 2.ABR测定数值 |
| 3.耳蜗毛细胞损害的光镜观察结果 |
| 4. 扫描电镜观察结果 |
| 讨论 |
（6）耳蜗血管纹的发育及异常所导致的耳聋疾病（论文提纲范文）
| 1 正常血管纹的结构 |
| 2 血管纹的功能 |
| 3 血管纹的发育 |
| 4 血管纹异常导致的耳聋疾病及其相关基因 |
（8）c-Myc及CyclinA2基因诱导大鼠耳蜗前体细胞增殖的体外研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 毛细胞再生的策略：认证前体细胞和关键基因 |
| 1 毛细胞前体的认证：内源性细胞替代损失HCs |
| 2 认证毛细胞和支持细胞分化的相关基因 |
| 3 总结 |
| 哺乳动物耳蜗发育中的细胞周期调控 |
| 1 细胞周期正性调控因子 |
| 2 细胞周期抑制因子 |
| 3 毛细胞再生中的细胞周期调控 |
| 内源性干细胞在内耳再生中的研究进展 |
| 1 内耳细胞的再生 |
| 2 成体干细胞 |
| 3 毛细胞的前体 |
| 4 螺旋神经节前体 |
| 5 利用内耳干细胞或前体细胞的再生 |
| 6 治疗方法 |
| 正文 |
| 实验一新生大鼠耳蜗前体细胞的分离、培养 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 不同日龄大鼠耳蜗前体细胞的增殖能力及超微结构的比较 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三c-Myc 基因在大鼠耳蜗发育和耳蜗前体细胞分化中的表达变化 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 Ad-c-Myc-EGFP 和Ad-CyclinA2-EGFP 的构建和在大鼠耳蜗前体细胞中的表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验五 c-Myc、CyclinA2 基因对耳蜗前体细胞增殖能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验六 c-Myc 与CyclinA2 基因促进耳蜗前体细胞增殖的作用机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）镫骨、耳蜗及其Corti器的建模与生物力学研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要词表 |
| 图表索引 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 耳蜗结构与功能概述 |
| 1.3 耳蜗模型及理论的国内外研究现状 |
| 1.4 生物力学在听觉生理研究中的应用 |
| 1.5 问题的提出 |
| 1.6 本文的主要内容及创新性 |
| 第二章 基于AFM测量分析内耳Corti器的弹性特征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 镫骨、耳蜗及Corti器的建模 |
| 3.1 几何模型的构建 |
| 3.2 镫骨、耳蜗及其Corti器的有限元模型的构建 |
| 3.3 结论 |
| 第四章 镫骨、耳蜗及Corti器力学行为的数值模拟 |
| 4.1 镫骨固有三维运动模式的有限元分析 |
| 4.2 基于Comsol模拟二种简化耳蜗的流场比较 |
| 4.3 Corti器动力学行为的二维有限元分析 |
| 4.4 盖膜与内毛细胞静纤毛相互作用的生物力学分析 |
| 4.5 外毛细胞静纤毛不同开角对剪切流体压力的响应 |
| 4.6 本章结论 |
| 第五章 基于LDV测量的镫骨模态频率的实验 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 结论与展望 |
| 全文结论 |
| 全文参考文献 |
| 综述 耳蜗相关结构的三维建模及其临床应用研究进展 |
| 在读期间参与的科研活动、发表论文及所获奖项 |
| 致谢 |
（10）新生大鼠脑干耳蜗核存在神经前体细胞的初步证据（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 神经干细胞的研究进展 |
| 听觉系统干细胞/前体细胞的研究 |
| 大鼠听力发育的研究进展 |
| 正文 |
| 实验一 新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的分离、培养 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞体外分化特性的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 新生大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的超微结构研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 大鼠脑干耳蜗核神经前体细胞的冻存与复苏 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
四、豚鼠内耳蜗管的超微结构（论文参考文献）
- [1]GPER通过cAMP/PKA途径调节衰老血管纹周细胞上BKCa通道的研究[D]. 周颖. 石河子大学, 2019(01)
- [2]Efr3a敲减减轻耳蜗螺旋神经元退化变性的研究[D]. 胡海霞. 上海交通大学, 2017
- [3]电针耳穴对硫酸卡那霉素慢性致聋豚鼠听觉中枢蛋白质组的影响[D]. 邓璐. 西南医科大学, 2016(05)
- [4]基于JNK信号通路探讨川芎嗪对庆大霉素耳肾毒性的干预作用及其机制[D]. 张巩. 浙江中医药大学, 2015(01)
- [5]复聪汤对工业噪声致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的研究[J]. 李胜利,朱宏亮,刘全征,王玮,刘艳平,史士合,李德,王福田. 中华中医药杂志, 2013(03)
- [6]耳蜗血管纹的发育及异常所导致的耳聋疾病[J]. 侯赟,郭维维,杨仕明,张小兵. 中华耳科学杂志, 2012(04)
- [7]回声定位蝙蝠耳蜗听黄斑区毛细胞形态研究[J]. 李胜利,赵谦,任田英,张少强,闫利英,刘思伟,王婉莹,朱宏亮. 听力学及言语疾病杂志, 2011(03)
- [8]c-Myc及CyclinA2基因诱导大鼠耳蜗前体细胞增殖的体外研究[D]. 钟翠萍. 第四军医大学, 2010(06)
- [9]镫骨、耳蜗及其Corti器的建模与生物力学研究[D]. 杨琳. 复旦大学, 2009(03)
- [10]新生大鼠脑干耳蜗核存在神经前体细胞的初步证据[D]. 薛涛. 第四军医大学, 2008(01)