一、波形蛋白在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其意义（论文文献综述）
董媛[1]（2019）在《内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究》文中提出研究目的和意义本研究拟通过一系列体内外实验,探索内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）对晶状体上皮细胞的增殖、凋亡、上皮-间质转化、胶原沉积、炎症因子表达等生物学行为和过程的影响,初步查明ERS与白内障的关系以及ERS参与白内障发生发展调控的机制。单核甘酸多态性是基因组最常见的遗传多态性形式,对金属基质蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2,MMP-2）基因 rs243865 位点的多态性检测和分析,为白内障遗传易感性与基因多态性的研究提供理论和实验数据,也可能为白内障的临床治疗提供新的手段。本研究丰富了白内障发病机制的研究,为寻找白内障潜在的生物学治疗靶点提供理论和实验支持。对候选基因的多态性分析,也可能为研发治疗药物和治疗手段提供新的思路,具有十分重要的临床意义和社会价值。方法1.将20只8日龄无特殊病原体（Specific pathogen free,SPF）级大鼠随机分为模型组和对照组,模型组大鼠按20 μ mol/kg一次性经腹腔注射亚硒酸钠溶液,隔日注射一次,连续5次,诱导建立硒性白内障大鼠模型,通过裂隙灯观察和病理检查验证造模成功。对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,其余操作同模型组。2.体外培养人晶状体上皮细胞,随机分为ERS激活剂组、ERS抑制剂组和对照组,分别给予细胞相应的处理措施。Western Blot检测各组晶状体上皮中ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白结合蛋白（Glucose regulation protein-78/Binding Protein 1,GRP78/Bip）、激酶 R 样内质网激酶（Protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）、活化转录因子（Activating transcription factor 4,ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP-homologous protein,CHOP）的表达水平,以及与晶状体上皮-间质转化相关的蛋白如α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、钙粘附蛋白E（E-cadherin）、MMP-2表达水平;MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫组化检测晶状体上皮中ⅣV胶原沉积情况;ELISA检测炎症因子的表达。3.利用TaqMan-MGB探针对晶状体上皮-间质转化密切相关的MMP-2基因rs243865位点的多态性进行检测和分析,初步探索MMP-2基因多态性与白内障易感性的关系。结果1.用20 μ mol/kg亚硒酸钠溶液经腹腔隔日注射5次,10天即成功在模型组大鼠中诱导出硒性白内障,建模成功率100%;其中晶状体Ⅱ级浑浊2例（20%）,Ⅲ级浑浊3例（30%）,Ⅳ级浑浊3例（30%）,Ⅴ级浑浊1例（10%）,Ⅵ级浑浊1例（10%）。2.HE染色后可见模型组大鼠晶状体正常上皮和异常上皮相间分布,异常上皮可见水肿、形态和大小不一,胞质淡然疏松,有大量空泡,核多形性,细胞间隙增大;纤维粗细不均一、排列无规律,纤维之间有囊泡和水裂,可见扭曲、断裂。3.白内障大鼠晶状体组织中GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组的（3.89±0.22）倍（p<0.01）、（2.97±0.09）倍（p<0.01）、（2.15±0.17）倍（p<0.01）和（3.11±0.19）倍（p<0.01）。4.ERS激活剂组SRA01/04细胞GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组细胞的（1.76±0.11）倍（p<0.01）、（3.62±0.17）倍（p<0.01）、（3.35 ± 0.13）倍（p<0.01）和（4.39±0.20）倍（p<0.01）;ERS 抑制剂组细胞GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组细胞的（0.43 ±0.05）倍（p<0.01）、（0.52±0.08）倍（p<0.01）、（0.32±0.06）倍（p<0.01）和（0.29 ± 0.04）倍（p<0.01）。5.ERS 激活剂组SRA01/04 细胞第 Ohr、12 hr、24 hr、48 hr、72 hr 和 96 hr存活率分别为（102±5）%,（108±9）%,（119±6）%,（134±5）%,（152±8）%,（168±8）%;ERS 抑制剂组 SRA01/04 细胞第 Ohr、12 hr、24 hr、48 hr、72 hr 和 96 hr 存活率分别为（102±4）%,（117 ± 7）%,（130±6）%,（162±7）%,（186±8）%,（209±8）%。ERS 激活剂处理的晶状体上皮细胞生长曲线整体在对照组下方,其中第48 hr、72 hr和96 hr的存活率与对照组有统计学差异（p<0.05）;ERS抑制剂处理的晶状体上皮细胞生长曲线整体在对照组上方,其中第48 hr和72 hr的存活率与对照组相比有统计学差异（p<0.05）。6.ERS激活剂组SRA01/04细胞凋亡率为（15.83±1.07）%,较对照组细胞的（7.94±0.56）%显着升高（p<0.01）;ERS抑制剂处理的SRA01/04细胞凋亡率为（5.05±0.71）%,较对照组细胞降低（p<0.05）。7.ERS激活剂组SRA01/04细胞α-SMA、E-cadherin和MMP-2蛋白表达水平分别是对照组的（2.78±0.13）倍、（0.29±0.09）倍和（1.70±0.08）倍（p均<0.01）;ERS 抑制剂组 SRA01/04 细胞α-SMA、E-cadherin 和 MMP-2 表达水平分别是对照组的（0.17±0.06）倍、（2.89±0.12）倍和（0.20±0.07）倍（p 均<0.01）。8.ERS激活剂组SRA01/04细胞中ⅣV胶原大量沉积,平均光密度为（0.65 ±0.08）,明显高于对照组的（0.23±0.03）（p<0.01）;ERS抑制剂处理组细胞中ⅣV胶原平均光密度为（0.11 ± 0.06）,低于对照组（p<0.05）。9.ERS激活剂组SRA01/04细胞IL-1 β、IL-6、CRP和TNF-lα表达水平分别为（42.53±4.14）ng/ml、（6.17±2.51）ng/ml、（9.27±0.80）mg/L 和（25.22±3.28）ng/ml;ERS 抑制剂组晶状体上皮 IL-1 β、IL-6、CRP 和 TNF-1α表达水平分别为（28.52 ± 5.00）ng/ml、（3.23±2.01）ng/ml、（2.01 ±0.35）mg/L 和（11.17±2.01）ng/ml;对照组晶状体上皮 IL-1 β、IL-6、CRP和 TNF-1α表达水平分别为（30.47 ± 4.83）ng/ml、（4.41±1.74）ng/ml、（2.23±0.29）mg/L 和（15.57±3.08）ng/ml。ERS 激活剂组晶状体上皮IL-1 β、IL-6、CRP和TNF-1α水平高于对照组（p<0.05）,ERS抑制剂组IL-6和TNF-1α水平低于对照组（p<0.05）。10.白内障组CC、CT和TT 3种基因型的检测频率和期望频率分别为62%和57.01%,30%和 39.90%,12%和 7.01%;对照组 CC、CT 和 TT 3 种基因型的检测频率和期望频率分别为72%和70.04%,25%和26.20%,3%和2.40%。经Hardy-Weinberg平衡定律吻合度检验,两组MMP-2基因的rs243865基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（p>0.05）,具有可比性。11.白内障组患者MMP-2基因多态性位点rs243865的GG、GA、AA三种基因型分布人数分别是62例、30例和12例,分别占57.01%、28.85%和11.54%;对照组MMP-2基因多态性位点rs243865的GG、GA、AA三种基因型分布人数分别是72例、25例和3例,分别占72%、25%和3%。三种基因型在两组分布有统计学差异（p<0.05）。12.白内障组患者C和T等位基因分布频率分别为74.04%和25.96%,对照组C和T等位基因分布频率分别为84.50%和15.50%,C/T等位基因在两组的分布频率有差异（p<0.05）。13.对MMP-2基因rs243865的遗传模型分析,白内障组和对照组在加性模型下存在差异（p<0.05）,但隐性模型和显性模型均无显着差异（p>0.05）。结论1.白内障大鼠晶状体组织中存在过度激活的ERS反应,ERS相关蛋白表达水平较正常大鼠明显升高;2.过度激活的ERS能抑制晶状体上皮细胞的增殖、促进细胞凋亡、上皮-间质转化、胶原沉积和炎症反应等生物学行为和过程,对白内障的发生发展有促进作用。3.MMP-2基因的rs243865位点多态性与人类白内障易感性相关。
李松蔓[2]（2019）在《高钙状态下衰老标记蛋白30对人晶状体上皮细胞系SRA01/04的保护作用》文中研究表明目的:研究表明,高钙导致晶状体上皮细胞（lens epithelial cells,LECs）钙稳态丧失与白内障的发生密切相关。故本课题拟在高钙培养状态下,研究衰老标记蛋白30（senescence marker protein 30,SMP30）表达量的改变对人LECs系SRA01/04细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响,拟进一步完善SMP30在白内障领域的基础研究。方法:本实验分为5组:SMP30高表达组（SMP30 over-expression group,OE）、SMP30 高表达阴性对照组（negative control OE group,NCOE）、SMP30沉默组（SMP30 knock down group,KD）、SMP30 沉默阴性对照组（negative control KD group,NCKD）及空白对照组（blank control group,CON）。根据本课题组前期实验基础,选择已构建成功的分别携带OE、NCOE、KD及NCKD基因的慢病毒载体,在预实验已确定的优化条件下,以感染复数（multiplicity of infection,MOI）等于5为基础,配制含适量的慢病毒及终浓度为5μg/mL Polybrene（助感染试剂）的完全培养基,培养及转染SRA01/04细胞,构建SMP30高表达及沉默SRA01/04细胞模型。根据预实验结果,用含15 mmol/L CaC12的完全培养基培养SRA01/04细胞24小时,用于模拟白内障形成时LECs处于高钙/钙紊乱的病理状态。后续用BrdU-Elisa法检测细胞增殖能力、CCK8法检测细胞活力、PI-FACS法检测细胞周期情况;Annexin V-APC单染法检测细胞凋亡率;超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）试剂盒（WST-1 法）检测细胞总 SOD 活力,评估细胞抗氧化能力;谷胱甘肽试剂盒检测细胞内氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione,GSSG）/总谷胱甘肽（total glutathione,T-GSH）水平,评估细胞内氧化应激水平。结果:（1）在最佳转染实验条件下,经过携带目的基因的慢病毒载体转染细胞后,用显微镜观察各组转染细胞,可见有大量绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）表达,转染效率接近80%,且细胞形态与未转染的SRA01/04细胞（CON组）相似,其生长状态良好,转染细胞多次传代后形态均一且性状尚稳定,提示SMP30高表达或沉默SRA01/04细胞模型构建成功。（2）在高钙培养状态下（15 mmol/LCaCl2作用24小时）,显微镜下可见大部分SRA01/04及转染细胞出现变形皱缩,边界不清,部分细胞呈长条形并长触角,有细胞出现碎裂、溶解。（3）每组细胞增殖情况:①BrdU-Elisa法检测结果显示:在高钙培养状态下,OE组（3.89±0.20）细胞相对增殖能力均高于 NCOE 组（2.82±0.34,P=0.003）及 CON 组（2.96±0.25,P=0.006）,NCOE组与CON组相比差异无统计学意义（P=0.551）（n=3,F=13.627,P=0.006）;KD组（2.42±0.08）相对细胞增殖能力均低于NCKD组（2.95±0.08,P=0.006）及 CON 组（P=0.006）,NCKD 组与 CON 组相比差异无统计学意义（P=0.971）（n=3,F=11.510,P=0.009）。②CCK8检测结果提示,在高钙培养的第1-5天内,每组细胞活力均可成指数性增长（n=5,P=0.000）,除CON组与NCKD组比较差异无统计学意义外（P=0.788）,其余组间任意两两比较差异均有统计学意义,其中OE组最高,KD组最低（n=5,P=0.000）。③PI-FACS法检测结果提示:在高钙培养状态下,OE组处于G1期（46.90±2.17%）的细胞构成比低于CON组的G1期（66.37±1.11%,P<0.05）,OE组处于S期（40.40±2.46%）的细胞构成比高于CON组的S期（20.81±1.25%,P<0.05）（n=3,x2=30.594,P=0.000）;KD 组处于 S 期（15.25±0.88%）的细胞构成比低于 NCKD 组的 S 期（25.97±0.77%,P<0.05）（n=3,x2=12.261,P=0.016）。（4）每组细胞凋亡情况:Annexin V-APC 单染法检测结果提示:在高钙培养状态下,OE组（1.66±0.20%）细胞凋亡率低于NCOE 组（2.36±0.22%,P=0.004）（n=3,F=29.136,P=0.001）;KD 组（6.11 ±0.03%）细胞凋亡率显着高于 NCKD 组（1.83±0.05%,P=0.000）及CON 组（1.22±0.12%,P=0.000）（n=3,F=3810.28,P=0.000）。（5）每组细胞氧化应激情况:①SOD活性检测结果提示:在高钙培养状态下,OE组（47.49±4.34 U/mg）SOD 活力显着高于 NCOE 组（30.55±4.15 U/mg,P=0.001）及 CON 组（26.76±1.49 U/mg,P=0.000）,NCOE 组与 CON 组相比差异无统计学意义（P=0.241）（n=3,F=28.635,P=0.001）;KD 组（11.69±0.53 U/mg）SOD 活力显着低于 NCKD 组（31.10±2.24 U/mg,P=0.000）及 CON 组（P=0.000）,NCKD 组 SOD 活力高于 CON 组（P=0.015）（n=3,F=124.249,P=0.000）。②谷胱甘肽含量检测结果提示:在高钙状态下,OE组GSSG/T-GSH 比值（2.36±0.51）低于 NCOE 组（16.36±2.48,P=0.000）及CON组（20.12±2.54,P=0.000）,NCOE组和CON组相比差异无统计学意义（P=0.068）（n=3,F=61.306,P=0.000）;KD 组 GSSG/T-GSH 比值（70.80±2.34）明显高于 NCKD 组（15.93±3.47,P=0.000）及 CON 组（P=0.000）,NCKD组和CON组相比差异无统计学意义（P=0.119）（n=3,F=349.813,P=0.000）。结论:在高钙培养状态下,SMP30表达量的增加可提高人LECs系SRA01/04细胞增殖活力,降低细胞凋亡率,提高细胞抗氧化能力,从而降低细胞氧化应激水平,提示增加SMP30的表达量可能对人LECs具有调控细胞增殖、抑制细胞凋亡及抗氧化应激的保护作用,在一定程度上可缓解高钙诱导细胞损伤的进程。
韩子豪[3]（2019）在《急性氧化应激状态下SMP30的变化对人晶状体上皮细胞的生长及氧化活性的影响》文中研究表明目的:观察人晶状体上皮细胞株（Human Lens Epithelial Cells,HLEC）SRA01/04处于急性氧化应激初期时,细胞内衰老标记蛋白30（Senescence Marker Protein 30,SMP30）含量的变化对SRA01/04生理功能的影响,对白内障病因和发展提供进一步的研究。方法:①实验所需最佳H2O2浓度的选择:将处于对数生长期的SRA01/04种入96孔板,使用含不同浓度（150μMOL·L-1、200μMOL·L-1、250μMOL·L-1、300μMOL·L-1、350μMOL·L-1、400μMOL·L-1、450μMOL·L-1）H202的培养基作用2 h,CCK8法选取最佳H2O2浓度建立处于急性氧化应激初期时的细胞模型。②实验所需细胞模型的构建:根据课题组前期研究,使用慢病毒对SRA01/04进行转染建立细胞模型:SMP30过表达（Over Expression,OE）组、SMP30 过表达相应空载（Negative Control Over Expression,NCOE）组、SMP30 沉默（Knock Down,KD）组、SMP30 沉默相应空载（Negative Control Knock Down,NCKD）组。转染成功后运用 q-PCR（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,实时定量聚合酶链反应）确定模型是否成功建立,之后将模型置于含最佳浓度H2O2的培养基中进行培养。③细胞功能的检测:利用细胞计数试剂盒Kit-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）对细胞活力进行检测,5-溴脱氧尿苷（BrdU）对各组细胞的增殖活性进行检测;通过流式细胞仪进行细胞周期分析及评估凋亡;使用SOD测试盒检测细胞抗氧化能力。结果:①通过预实验,确定建立处于急性氧化应激状态细胞模型的最合适的H2O2浓度为300μMOL·L-1。②使用q-PCR技术来确定OE、NCOE、KD、NCKD组SRA01/04细胞系的转染效率,与NCOE组相比,OE组细胞的表达丰度为其的18.378倍,与NCKD组相比,KD组细胞的沉默效率约为94%。③通过CCK-8测定显示,与NCOE组及CON组相比,OE组的细胞活力升高（P<0.05）,与NCKD组及CON组相比,KD组的细胞活力降低（p<0.05）,Brdu增殖实验示,与CON组（5.618±0.295）及相比,OE组（7.681 ±0.490）增殖能力提高（p<0.01）,与 NCOE 组（5.886±0.387）相比,OE 组（7.681 ±0.490）增殖能力提高（p<0.01）,与 CON 组（5.618±0.295）相比,KD 组（4.777±0.353）增殖能力降低（p<0.05）,与 NCKD 组（5.494±0.067）相比,KD组（4.777±0.353）增殖能力降低（p<0.05）,流式细胞仪分析指出处于急性氧化应激下的OE组细胞处于DNA合成后期和细胞分裂期的细胞数量显着增多,同时处于DNA合成前期的细胞减少,KD组细胞处于细胞分裂期的细胞明显减少,同时处于DNA合成前期与DNA合成期的细胞数量无明显变化。通过细胞凋亡测定的结果显示与NCOE组（2.28±0.059）相比,OE组（1.94±0.066）的细胞凋亡率降低（p<0.01）;同时,与 NCKD 组（1.86±0.107）相比,KD组（6.28±0.176）细胞凋亡率显着增高（p<0.01）。通过SOD测定试剂盒（WST-1法）检测各组细胞SOD活力值,与NCOE组细胞（10.734±0.651）相比,OE 组细胞（17.523±0.975）SOD 活力值升高（p<0.01）,与 CON 组细胞（11.985±0.364）相比,OE 组细胞（17.523±0.975）SOD 活力值升高（p<0.01）;与NCKD组细胞（10.781 ±0.060）相比,KD组细胞（8.150±0.506）SOD 活力值下降（p<0.01）,与 CON 组细胞（11.985±0.364）相比,KD组细胞（8.150±0.506）SOD活力值下降（p<0.01）.结论:建立处于急性氧化应激初期的SRA01/04细胞模型的最佳H2O2浓度与时间为300μMOL·L-1 2h。当SRA01/04处于急性氧化应激初期时,SMP30含量的增加可有效促进细胞的生长活性、增殖能力、抗氧化能力,同时抑制细胞凋亡。增加细胞内SMP30的含量可以抑制或延缓HLEC SRA01/04受氧化应激影响而引起的白内障。
刘铁刚[4]（2019）在《不同波长LED光对晶状体影响的初步研究》文中提出目的:发光二极管光源即LED光源,由于其绿色、环保,光线品质好,光效高,易于维护等优点,广范应用于如室内外照明、交通信号灯、路灯以及电子设备显示屏背光等领域。由于LED光源制造原理与前几代光源显着不同,光线成分相对复杂,因此人们对于LED光的光生物安全性缺乏深入了解。白内障是重要的致盲眼病,年龄相关性白内障疾病发生发展较为缓慢,且机制尚未完全阐明。晶状体为眼内重要屈光介质,经常受到各种光线的侵扰。本实验将利用活体动物实验的方法,探究LED光对于晶状体上皮细胞的影响包括白光LED对于晶状体上皮细胞形态学的影响与细胞内部caspase-3与P21表达的影响。另外,本研究将探究不同峰值波长的LED光对于晶状体内抗氧化酶活性（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶）的影响以及比较不同峰值波长的LED光照后晶状体内部脂质过氧化反应（丙二醛含量）的程度,以评价LED光致晶状体氧化损伤程度与其峰值波长之间的关系及变化规律。通过以上研究综合评价LED光对于晶状体的影响,并根据实验结果从晶状体光损伤的角度对LED光源的制造与使用提出实用的建议,推动绿色照明工程进行。最后,本研究将针对硫辛酸的抗氧化作用,结合LED蓝光对于晶状体的氧化应激效应,观察硫辛酸对于LED光诱导的晶状体内部氧化-抗氧化系统失衡将产生怎样的作用。方法:本实验分为三个部分。第一部分使用白色LED光（色温为4500K,照度为500勒克斯、1000勒克斯、1500勒克斯）照射活体SD大鼠5天,每天12小时（12h明-12h暗,6:00 a.m.-18:00 p.m.）。使用HE染色观察大鼠晶状体上皮细胞石蜡切片。分别为使用Real-time PCR检测大鼠晶状体上皮细胞内caspase-3与P21waf1/cip1mRNA水平。使用western-blotting检测上皮细胞内caspase-3与P21waf1/cip1蛋白表达水平。使用全自动生化检测仪检测晶状体内SOD、GSH-Px及MDA含量,并进行比较分析。第二部分使用相同照度（500勒克斯）不同峰值波长的LED光（红、绿、蓝）分别照射大鼠晶状体,连续5天,每天12小时（12h明-12h暗,6:00 a.m.-18:00 p.m.）。取大鼠晶状体组织,使用全自动生化检测仪检测晶状体内SOD、GSH-Px及MDA含量,并进行比较分析。第三部分使用与第二部分相同参数时间以及剂量的LED蓝光照射SD大鼠,分别观察给药组与单纯照射组大鼠晶状体内MDA、SOD以及GSH-Px指标的变化。结果:1.HE染色显示对照组大鼠晶状体上皮细胞细胞形态扁平,单层排列,整齐一致。白光LED照射组大鼠晶状体上皮细胞排列紊乱、细胞肿胀,晶状体上皮细胞由正常的单层分布改变为双层甚至多层排列。2.Real-time PCR结果显示对照组、500勒克斯组、1000勒克斯组以及1500勒克斯组caspase-3 mRNA表达倍数分别为1.00、1.77、3.21、5.05,除对照组和500勒克斯组无统计学差异（P>0.05）外,其余各组表达倍数间比较均具有统计学意义（P<0.05）。P21waf1/cip1mRNA表达倍数分别为1.00、1.95、3.11、4.48,除对照组和500勒克斯组无统计学差异（P>0.05）外,其余各组表达倍数间比较均具有统计学意义（P<0.05）。Western-blotting结果显示对照组、500勒克斯组、1000勒克斯组以及1500勒克斯组caspase-3蛋白条带灰度值分别为0.33、0.54、0.72、0.873,各组灰度值间比较均具有统计学意义（P<0.05）。对照组、500勒克斯组、1000勒克斯组以及1500勒克斯组P21waf1/cip1蛋白条带灰度值分别为0.28、0.40、0.53、0.67,各组灰度值间比较均具有统计学意义（P<0.05）。3.HE染色显示蓝光组大鼠晶状体上皮细胞与白光LED光照组类似呈现细胞排列紊乱、肿胀,晶状体上皮细胞由正常的单层分布改变为双层甚至多层排列的形态改变;绿光照射组细胞轻度肿胀,部分区域呈现双层排列形态;红光组大鼠晶状体上皮细胞呈现单层、扁平、排列整齐的正常形态,与对照组一致。4.对照组、红光、绿光、蓝光照射组大鼠晶状体内MDA含量分别约为0.0043 U/mgprot,0.0044 U/mgprot,0.0156 U/mgprot,0.0178 U/mgprot,除红光组与对照组间无统计学差异（P>0.05）外,其余各组间比较均具有统计学差异（P<0.05）。对照组、红、绿、蓝光照射组大鼠晶状体内SOD活力分别约为1.30 U/mgprot、7.93 U/mgprot、3.07 U/mgprot、2.12U/mgprot,各组间比较均有统计学差异（P<0.05）;对照组、红、绿、蓝光照射组大鼠晶状体内GSH-Px活力分别约为1.41 U/mgprot、9.79 U/mgprot、2.69U/mgprot、2.16 U/mgprot,各组间比较均有统计学差异（P<0.05）。5.蓝光照射5天后,未给药组大鼠晶状体内MDA含量为0.02210 U/mgprot,明显高于给予硫辛酸喂食组0.01290 U/mgprot,差异具有统计学意义（P<0.05）;另外,经测定,仅接受蓝光照射的蓝光组大鼠晶状体内SOD活力为2.1212 U/mgprot、GSH-Px活力为2.69610 U/mgprot均明显低于给药组大鼠晶状体内SOD活力（2.9101U/mgprot）以及GSH-Px活力（4.70530 U/mgprot）,差异具有统计学意义（P<0.05）;给药组大鼠晶状体内SOD与GSH-Px活力与空白对照组晶状体内SOD活力（1.3035 U/mgprot）与GSH-Px活力（1.41340 U/mgprot）相比亦显着升高差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.白色LED光（色温为4500K,照度为500勒克斯）在活体照射下即可以引起晶状体上皮细胞肿胀、排列紊乱等异常形态改变。2.白色LED光（色温为4500K,照度大于500勒克斯）可以引起晶状体内脂质过氧化产物升高,抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活力下降,且具有照度依赖性,照度越高的LED光对于晶状体氧化损伤的风险也较大。3.发光二极管所发出的光线光谱波长越短,对大鼠晶状体氧化损伤指标影响越大（MDA升高、SOD、GSH-Px活力下降）,造成晶状体损伤的风险也越大。4.活体动物实验结果表明,高色温LED光对晶状体危害大于低色温LED光。5.在蓝光诱导的晶状体氧化损伤中,硫辛酸可以通过提高SOD与GSH-Px活力拮抗晶状体内部脂质过氧化物的堆积,其对晶状体光氧化损伤可能具有一定的保护作用。
马成霞[5]（2018）在《EphA2在地塞米松作用的人晶状体上皮细胞中的表达变化及其意义》文中指出背景:糖皮质激素性白内障（glucocorticoid induced cataract,GIC）被定义为局部或全身使用糖皮质激素引起的晶状体后囊下混浊（posterior subcapsular opacities,PSO）,简称为激素性白内障。GIC是全身或局部使用糖皮质激素引起的眼部主要并发症。Black于1960年首次报道了激素的应用与白内障的关系,随后相继有学者报道全身应用、局部应用及气道吸入糖皮质激素均可引起GIC。随着器官移植的普遍开展、过敏性疾病发生率的增高及外伤救治水平的提高、角膜屈光手术的广泛开展,对葡萄膜炎等自身免疫性疾病认识的不断深入,糖皮质激素的应用范围越来越广,GIC的发病率有逐渐上升的趋势。GIC已引起各科临床医生的广泛关注,深入研究GIC的发病机制及防治措施具有重要的临床意义。有关激素性白内障的发病机制,主要有细胞凋亡调节失控学说、糖皮质激素受体学说、蛋白质加合物形成学说、离子转运障碍学说、细胞分化异常学说、细胞黏附异常学说及氧化-构象损伤学说。凋亡是细胞为了维持内环境的稳定而在基因调控下的程序性死亡,是存在于细胞内部的一种正常生理现象。然而在有害因素作用下,组织细胞发生过度凋亡则可导致疾病的发生。研究发现,除先天性白内障以外其它类型白内障发生的共同细胞学基础为晶状体上皮细胞凋亡。因此,防治非先天性白内障的研究重点是如何调控晶状体上皮细胞的凋亡。生促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶受体A2（erythropoietin-producing hepatocellular receptor tyrosinekinase-type A2,EphA2）是由 Lindberg 于 1990 年从人类角化上皮细胞cDNA文库中筛选得到,其广泛表达于皮肤、肺、胃肠道、卵巢等上皮源性正常细胞和肿瘤细胞,属于受体酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）家族中最大的一个亚族。其介导的信号传导,如活化丝裂素活化蛋白激酶途径,导致ERK活化,参与调控细胞凋亡、细胞增殖、细胞间黏附和细胞迁移等多种功能。EphA2基因高表达与肿瘤细胞抗凋亡密切相关,沉默EphA2基因可导致肿瘤细胞的凋亡。EphA2基因在晶状体上皮细胞中有广泛表达,对维持晶状体的正常发育及透明性起重要作用。近年来研究发现,EphA2基因异常表达与白内障的发生具有密切关系,但具体作用机制尚不完全清楚。有关EphA2在地塞米松作用的晶状体中的表达变化及其在激素性白内障发病机制中的作用,目前国内外尚未见相关报道。因此,本实验首先检测不同浓度地塞米松作用48h后,人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖和凋亡的变化及EphA2的表达变化,并构建人EphA2基因慢病毒表达载体,体外转染人晶状体上皮细胞HLE-B3,进一步研究EphA2基因过表达对正常人晶状体上皮细胞HLE-B3和地塞米松作用的人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖及凋亡的影响,探讨EphA2在激素性白内障发病中的作用机制。本研究共分为三部分:第一部分:检测不同浓度地塞米松作用48h后,人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖和凋亡的变化情况及EphA2的表达变化。第二部分:构建人EphA2基因慢病毒表达载体,体外转染人晶状体上皮细胞HLE-B3,探索最佳MOI值,人为上调细胞中EphA2的表达。第三部分:观察EphA2基因过表达对正常人晶状体上皮细胞HLE-B3和地塞米松作用的人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖及凋亡的影响。第一部分不同浓度地塞米松对人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖和凋亡的影响和EphA2的表达变化目的:观察不同浓度地塞米松作用后,人晶状体上皮细胞（HLE-B3）增殖和凋亡的变化及细胞中EphA2的表达变化。方法:根据地塞米松浓度的不同,分为以下5组:Omol/L组（空白对照组）、10-7mol/L组、10-6mol/L组、10-5mol/L组和10-4mol/L组。地塞米松作用人晶状体上皮细胞（HLE-B3）48h后,CCK-8试剂盒检测各组细胞的存活率;Tunel检测凋亡指数,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测EphA2蛋白的表达水平。结果:1.CCK-8 结果显示:Omol/L 组（空白对照组）、10-7mo1/L 组、10-6mol/L、10-5mol/L 组和 10-4mol/L 组细胞存活率分别为（98.24±1.74）%、（108.62±1.32）%、（73.13±3.41）%、（53.36±3.75）%和（44.85±3.18）%。5 组的总体比较差异有统计学意义（F=1497.598,P=0.001）;5组中任意两组比较,差异亦有统计学意义（P值均为0.001）。与对照组比较,10-7mol/L组细胞存活率明显升高;10-6mol/L组、10-5mol/L 组及10-4mol/L 组 HLE-B3 存活率逐渐下降。10-5mol/L 组 HLE-B3 的存活率为（53.36±3.75）%,接近半数致死剂量。2.Tunel 检测结果:Omol/L 组（对照组）、10-7mol/L 组、10-6mol/L 组、10-5mol/L组和10-4mol/L 组 HLE-B3 凋亡指数分别为（4.9±1.2）%、（4.8±0.8）%、（17.1±3.0）%、（25.3±3.6）%和（28.4±4.1）%。5组的总体比较差异有统计学意义（F=1972.95,P=0.001）。10-7mol/L组的凋亡指数略低于Omol/L组（对照组）,但差异无统计学意义（P= 0.756）;余任意两组比较,差异均有统计学意义（P值均=0.001）。3.流式细胞术检测结果:0mol/L组（空白对照组）、10-7mol/L组、10-6mol/L、10-5mol/L 组和 10-4mol/L 组 HLE-B3 凋亡率分别为（5.9±1.0）%、（5.7±1.5）%、（25.4±4.3）%、（30.8±5.5）%和（33.7±4.7）%。5组的总体比较差异有统计学意义（F=438.99,P= 0.001）。10-7mol/L组的凋亡率略低于0mol/L组（对照组）,但差异无统计学意义（P= 0.916）,余任意两组比较,差异均有统计学意义（P值均=0.001）。与Tunel检测结果检测结果一致。4.Western blot 结果:0mol/L 组（空白对照组）、10-7mol/L 组、10-6mol/L、10-5mol/L组和10-4mol/L组HLE-B3中EphA2蛋白的相对表达量分别为（0.5641±0.0252）、（0.7534±0.0236）、（0.3921±0.0149）、（0.2893±0.0168）和（0.2004±0.0102）。5组总体比较差异有统计学意义（F=398.324,P=0.001）。10-7mo1/L组EphA2蛋白的表达较对照组明显上调,差异有统计学意义（P=0.001）。其余3组中EphA2蛋白的表达逐渐下降,呈剂量依赖性下调。结论:1.地塞米松浓度为10-7mol/L时,可促进晶状体上皮细胞HLE-B3细胞的增殖;地塞米松浓度为10-6mol/L至10-4mol/L时,可抑制晶状体上皮细胞HLE-B3细胞的增殖。2.地塞米松浓度为10-7mol/L时,对晶状体上皮细胞HLE-B3细胞的凋亡无影响;地塞米松浓度为10-6mol/L至10-4mol/L时,可促进晶状体上皮细胞HLE-B3的凋亡,且呈剂量依赖性。3.地塞米松浓度为10-7mol/L时,晶状体上皮细胞HLE-B3中EphA2蛋白的表达上调;地塞米松浓度为10-6mol/L至10-4mol/L时,晶状体上皮细胞HLE-B3中EphA2蛋白的表达下调。第二部分 人EphA2基因慢病毒表达载体构建及体外转染人晶状体上皮细胞HLE-B3的实验研究目的:构建人EphA2基因表达载体,包装慢病毒。探索人EphA2基因慢病毒表达载体体外转染人晶状体上皮细胞HLE-B3的最佳MOI值;CCK-8检测载体的细胞毒性;嘌呤霉素筛选转染阳性细胞;Western blot检测筛选细胞及筛选细胞传代后EphA2蛋白的表达水平。方法:1.慢病毒介导的人EphA2基因表达载体的构建以人cDNA-EphA2为模板,设计含NOT Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点的上下游引物,PCR扩增EphA2的CDS区。载体pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP双酶切后和扩增的目的基因EphA2以CE重组酶进行连接。转化感受态细菌后挑选正确的克隆行PCR、酶切及测序鉴定。应用Lipofectamine 2000共同转染HEK 293T/17细胞,包装慢病毒。72h后收获病毒原液,离心过滤,超速离心后将沉淀重悬得到病毒储存液,梯度法测定滴度。2.分别以MOI值0、20、50、100、200转染人晶状体上皮细胞HLE-B3,转染72h后荧光显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测转染效率,探索最佳MOI 值。3.以最佳MOI转染人晶状体上皮细胞HLE-B3 72h后,CCK-8检测未转染组、空载体转染组和EphA2慢病毒表达载体转染组的细胞存活率。4.Western blot检测未转染组、空载体转染组和EphA2慢病毒表达载体转染组EphA2蛋白的表达水平。5.配制浓度分别为 2.0μg/ml、4.0μg/ml、6.0μg/ml、8.Oμg/ml 和 10.0μg/ml 的嘌呤霉素筛选转染细胞。6.Western blot检测筛选阳性细胞传代后人晶状体上皮细胞HLE-B3中EphA2蛋白的表达。结果:1.PCR、酶切和测序均证实EphA2慢病毒表达载体序列正确。HEK 293T/17细胞包装后获得了病毒储存液,病毒的滴度为2.3×1O7TU/ml至2.7×107TU/ml。2.MOI 为 0、20、50、100 和 200 时,转染效率分别为 0.0%、（38.6±3.9）%、（49.2±4.2）%、（79.5±5.5）%和（80.2±6.0）%,总体比较差异有统计学意义（F=2600.845,P=0.001）;MOI=200 与 MOI=100 比较,转染效率无明显提高（P=2.507）。MOI为0、20、50、100时,细胞形态无改变;MOI为200时,部分细胞形态不规则。3.CCK-8检测,未转染组、空载体转染组和EphA2慢病毒表达载体转染组细胞存活率分别为（98.26±1.03）%、（97.74±1.19）%和（105.87±2.09）%,总体比较差异有统计学意义（F=26.945,P=0.001）。其中正常对照组与空载体转染组相比差异无统计学意义（P=0.686）,余两两比较差异均有统计学意义（P值均为0.001）。4.Western blot结果显示,未转染组、空载体转染组和EphA2慢病毒表达载体转染组EphA2蛋白相对表达量分别为（0.5612±0.0317）、（0.5597±0.0128）和（3.0320±0.0419）。总体比较,差异有统计学意义（F=2465.974,P=0.001）;未转染组与空载体转染组比较,差异无统计学意义（P=0.868）。EphA2慢病毒表达载体转染组EphA2蛋白的表达量较未转染组提高了 4.4倍。5.筛选2天后,8μg/ml嘌呤霉素组未转染成功的细胞（红色荧光蛋白阴性）刚好全部死亡;6μg/ml组仍见少量红色荧光蛋白阴性细胞,4μg/ml组RFP阴性细胞存活率更高。6.正常对照组、嘌呤霉素筛选组和嘌呤霉素筛选细胞传代组EphA2蛋白的相对表达量分别为（0.5583±0.0285）、（3.1751±0.0224）、（3.1748±0.0253）。总体比较,差异有统计学意义（F=2801.057,P= 0.001）;其中嘌呤霉素筛选组与嘌呤霉素筛选细胞传代组比较,差异无统计学意义（P=0.973）。结论:1.成功构建人EphA2慢病毒表达载体。2.人EphA2慢病毒表达载体转染人晶状体上皮细胞HLE-B3的最佳MOI值为100,转染效率为（79.5±5.5）%。3.外源性EphA2蛋白可在人晶状体上皮细胞HLE-B3中稳定高效表达。4.EphA2基因过表达对人晶状体上皮细胞HLE-B3的增殖有促进作用。第三部分EphA2基因过表达对正常人晶状体上皮细胞HLE-B3和地塞米松作用的人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖和凋亡的影响目的:探讨EphA2基因过表达对正常人晶状体上皮细胞HLE-B3和地塞米松作用的人晶状体上皮细胞HLE-B3增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:根据第一部分的实验结果,选择10-5mOl/L地塞米松作为实验浓度。实验分为以下四组:正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2过表达细胞联合地塞米松组。CCK-8检测各组细胞的存活率。Tunel检测凋亡指数,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测各组细胞BCL-2、Bax和Caspase-3的表达水平。结果:1.CCK-8结果显示:正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2过表达细胞联合地塞米松组HLE-B3的存活率分别为（98.18±1.85）%、（122.01±3.89）%、（52.32±1.99）%、和（76.18±3.74）%。组间比较,差异有统计学意义（F=497.557,P=0.001）;EphA2过表达细胞组存活率高于正常细胞组,差异有统计学意义（P=0.001）;EphA2过表达细胞联合地塞米松组存活率高于正常细胞联合地塞米松组,差异有统计学意义（P=0.001）。2.Tunel检测结果:正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2.过表达细胞联合地塞米松组的凋亡指数分别为（5.4±1.5）%、（5.0±1.3）%、（23.0±3.9）%、和（14.4±2.7）%。组间比较,差异有统计学意义（F=397.638,P=0.001）;EphA2过表达细胞组凋亡指数略低于正常细胞组,但差异无统计学意义（P=0.415）;正常细胞联合地塞米松组凋亡指数较正常细胞组高,差异有统计学意义（P=0.026）;EphA2过表达细胞联合地塞米松组凋亡指数低于正常细胞联合地塞米松组,差异有统计学意义（P=0.018）。3.流式细胞术检测结果:正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2过表达细胞联合地塞米松组的凋亡率分别为（6.4±1.3）%、（6.1±1.5）%、（28.8±3.4）%和（18.5±2.0）%。4组总体比较,差异有统计学意义（F =2194.309,P=0.001）;正常细胞组与EphA2过表达细胞组比较,差异无统计学意义（P=0.421）;EphA2过表达细胞联合地塞米松组凋亡率高于EphA2过表达细胞组（P=0.001）,但低于正常细胞联合地塞米松组（P=0.015）。4.Westen-blot检测:正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2过表达细胞联合地塞米松组BCL-2蛋白的相对表达量为（0.4227±0.0075）、（2.7733±0.0796）、（0.1370±0.0036）和（1.6533±0.0176）。Bax 蛋白的相对表达量分别为（0.6917±0.0086）、（0.5810±0.0040）、（1.0390±0.0155）、（0.8260±0.0142）。4 组中 BCL-2 蛋白/Bax 蛋白的值分别为（0.6111±0.0050）、（4.7736±0.1448）、（0.1318±0.0017）、（2.0021±0.0480）。4 组总体比较,三个指标的差异均有统计学意义（FBCL-2=2624.043,FBax=875.562,FBcL-2/Bax=2235.033;P值均为0.001）;两两比较,差异均有统计学意义（P=0.001）。正常细胞组、EphA2过表达细胞组、正常细胞联合地塞米松组、EphA2过表达细胞联合地塞米松组Caspase-3 蛋白的相对表达量分别为（0.6783±0.0255）、（0.6538±0.0154）、（2.5713±0.0385）和（1.0930±0.0144）。4组总体比较,差异有统计学意义（FCaspase-3=3796.514,P=0.001）;其中EphA2过表达细胞组与正常细胞组比较,无统计学差异（P=0.205）,余两两比较,差异均有统计学意义（P=0.001）。结论:1.EphA2基因过表达对正常状态下的人晶状体上皮细胞HLE-B3具有促增殖作用;对地塞米松导致的HLE-B3增殖抑制具有保护作用。2.EphA2基因过表达对HLE-B3生理状态下的细胞凋亡无保护作用;对地塞米松导致的HLE-B3的凋亡具有保护作用。3.EphA2通过上调BCL-2和阻止Bax和Caspase-3过表达发挥对地塞米松导致的HLE-B3凋亡的保护作用。
杨静[6]（2015）在《人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化》文中指出目的研究人原代晶状体上皮细胞中,下调色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor,PEDF）的表达对波形蛋白和αB-晶状体蛋白表达的影响。方法取2035岁青年人晶状体上皮细胞进行原代培养。构建三种短发卡RNA（short hairpin RNA,shRNA）以特异性下调原代人晶状体上皮细胞中的PEDF基因RNA表达水平。感染细胞后,用Real-time PCR检测PEDF基因mRNA的表达水平,确定RNA干扰效率。人原代晶状体上皮细胞PEDF基因RNA干扰48 h后,用Western Blot检测其中波形蛋白以及αB-晶状体蛋白表达水平的变化,以shRNA-scramble组为阴性对照组。结果人原代晶状体上皮细胞被成功分离培养,带有绿色荧光蛋白的表达PEDF shRNA的病毒载体对人原代晶状体上皮细胞的感染效率都在80%左右。Realtime PCR结果显示PEDF基因mRNA的表达明显被三种shRNA下调。Western Blot结果显示PEDF基因的表达下调引起了波形蛋白的表达下降（在三个实验组中分别下降了72%、79%和93%）以及αB-晶状体蛋白的表达增加（在三个实验组中分别增加了219%、204%、93%）。结论人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调可引起维持晶状体透明性的两种重要蛋白的改变,提示PEDF与白内障形成有一定的联系。
葛佳佳,苏胜,刘平[7]（2015）在《地塞米松对人晶状体上皮细胞中波形蛋白表达的影响》文中提出目的探讨地塞米松（dexamethasone,Dex）对人晶状体上皮细胞系（human lens epithelial cells,HLEC）中波形蛋白表达的影响以及波形蛋白表达变化在糖皮质激素性白内障形成中的作用。方法对HLEC进行传代培养,应用DMEM和DMEM+1μmol·L-1Dex作用于HLEC 7 d,采用实时PCR和Western-blot从基因水平和蛋白水平检测波形蛋白的表达变化,采用免疫荧光染色法检测波形蛋白在细胞中的分布及表达变化。结果实时PCR结果显示,Dex组较对照组波形蛋白mRNA表达减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）。Western-blot检测结果显示,Dex组较对照组波形蛋白含量减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）,提示Dex可降低波形蛋白的表达。免疫荧光染色结果显示Dex组较对照组波形蛋白表达减少,与Western-blot检测结果一致。结论 Dex可诱导HLEC中波形蛋白表达减少,从而引起HLEC异常的增殖和分化,最终导致糖皮质激素性白内障的形成。
葛佳佳,苏胜,刘平[8]（2014）在《波形蛋白与糖皮质激素性白内障的关系》文中认为长期全身或局部使用糖皮质激素可引起晶状体后囊下混浊（posterior subcapsular opacities,PSO）,称为糖皮质激素性白内障（glucocorticoid-induced cataract,GIC）。有关GIC的发病机制,有多种假说,但都不能很好地解释PSO的形成过程,因而在预防和治疗上尚无有效手段。有新观点认为,激素可能通过其受体介导的波形蛋白的改变影响晶状体上皮细胞增殖和分化,最终导致GIC的形成。因此,研究波形蛋白对晶状体上皮细胞增殖和分化的影响,可能是GIC发病机制研究的一个新方向。
徐莺歌,刘冬瑞,刘平,张红[9]（2014）在《波形蛋白与糖皮质激素性白内障发病关系的研究进展》文中研究指明长期全身或局部应用糖皮质激素较易导致晶状体后囊膜混浊,形成糖皮质激素性白内障,机理尚不明确。随着糖皮质激素在器官移植、免疫系统障碍、过敏及创伤救治等治疗过程中的大量应用,激素性白内障的发生率也大幅上升,因此,糖皮质激素性白内障也越来越受到人们的重视。目前对于糖皮质激素性白内障的发病机制尚不明确,主流的包括氧化-构象学说、蛋白复合物形成学说、细胞粘附分子异常学说及糖皮质激素作用于糖皮质激素受体从而发生改变的学说。激素发生改变的方法也许同晶状体蛋白共同作用或者协同作用均相关,就像通过细胞调控、粘附调节、受体等协同作用发生改变。而以往的研究表明波形蛋白在晶状体上皮细胞中正确和准确的存在,可起着保持晶状体细胞基本状态的首要作用。同时波形蛋白在晶状体里的反应会导致晶状体上皮细胞的变化,及晶状体细胞基本状态的变化。近来研究发现,糖皮质激素受体介导的晶状体波形蛋白的改变参与了激素性白内障的形成。
王慧[10]（2011）在《年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子和启动子的研究》文中研究指明目的:探讨波形蛋白基因（Vimentin）外显子和启动子序列（包括链接外显子和启动子的5’非翻译区,5’UTR）与中国汉族人群年龄相关性皮质性白内障的关系。方法:选择年龄相关性皮质性白内障患者138例（病例组）及同一地区正常对照133例（对照组）进行以医院病例资料为基础的对照研究。以外周血基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）扩增Vimentin基因外显子、5’UTR以及启动子,并将PCR产物纯化后测序。测序结果与GenBank公布的Vimentin基因正常序列比对。所有受试对象均对六种单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）,分别是:VIM:rs3758410（VIM:g. 17271400G>C）、VIM:g. 17271110G>C、VIM:g. 17270912A>G、VIM:rs17140300（VIM:g. 17269762A>G）、VIM:g. 17268954C>G和VIM:g. 17268834T>C进行基因分型分析。基因分型和单倍体表型采用卡方检验进行分析。结果:病例组和对照组,Vimentin基因全部外显子序列中,并未发现突变或是SNPs。病例组和对照组Vimentin基因5’UTR有两种SNPs具有显着性差异。VIM:rs3758410（VIM:g. 17271400G>C）等位基因频率在年龄相关性皮质性白内障组中显着高于正常对照组（P =0.0001, OR: 2.208）。VIM:g. 17271110G>C基因分型频率在年龄相关性皮质性白内障组高于正常对照组（P =0.04, OR: 1.591）。VIM:g. 17270912G和VIM:g.17271110C-22G的单倍型与年龄相关性皮质性白内障呈强相关性（P=0.008, OR: 8.185）。两组Vimentin基因启动子序列中发现三种SNPs,分别是:VIM:rs17140300（VIM:g. 17269762A>G）、VIM:g. 17268954C>G和VIM:g. 17268834T>C。暂时未发现此三种SNPs与年龄相关性皮质性白内障相关（P >0.05）。结论:中国汉族人群年龄相关性皮质性白内障的发病与Vimentin基因外显子无关。本研究首次发现Vimentin基因与中国汉族人群年龄相关性皮质性白内障相关的新的SNPs,即VIM:g. 17271110G>C、VIM:g. 17270912A>G、VIM:g. 17268954C>G和VIM:g. 17268834T>C。本研究首次在年龄相关性皮质性白内障中发现VIM:rs3758410（VIM:g. 17271400G>C）和VIM:rs17140300（VIM:g. 17269762A>G）。VIM:g. 17270912G和17271110C-22G是中国汉族人群年龄相关性皮质性白内障的候选单倍型。
二、波形蛋白在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、波形蛋白在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其意义（论文提纲范文）
（1）内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 绪论 |
| 一、晶状体的一般生理 |
| 二、白内障的类型和发病机制 |
| 三、内质网应激与白内障 |
| 四、本研究的内容和意义 |
| 第一部分 硒性白内障大鼠模型的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法公司 |
| 1.4.1 实验分组 |
| 1.4.2 造模 |
| 1.4.3 实验观察 |
| 1.4.4 晶状体浑浊程度判断依据 |
| 1.4.5 组织病理染色 |
| 1.4.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况 |
| 2.2 晶状体浑浊情况观察 |
| 2.3 晶状体HE染色检查 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 内质网应激对晶状体上皮细胞增殖、上皮-间质转化、胶原沉积、炎症反应等生物学行为的调控作用研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞系 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 方法 |
| 1.5.1 大鼠处理 |
| 1.5.2 细胞培养和分组 |
| 1.5.3 组织和细胞总蛋白提取和定量 |
| 1.5.4 Western Blot检测目的蛋白表达 |
| 1.5.5 免疫组化检测IV型胶原沉积 |
| 1.5.6 MTT检测细胞增殖 |
| 1.5.7 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 1.5.8 ELISA检测炎症因子 |
| 2. 结果 |
| 2.1 Western Blot检测白内障大鼠晶状体中ERS相关GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP的表达水平 |
| 2.2 晶状体上皮细胞培养与活性鉴定 |
| 2.3 Western Blot检测晶状体上皮细胞系ERS相关GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP的表达水平 |
| 2.4 MTT法检测ERS对晶状体上皮细胞增殖的影响 |
| 2.5 流式细胞术检测ERS对晶状体上皮细胞凋亡的影响 |
| 2.6 Western Blot检测ERS对晶状体上皮-间质转化的影响 |
| 2.7 免疫组化检测ERS对晶状体上皮IV型胶原沉积的影响 |
| 2.8 ELISA检测ERS对晶状体上皮炎症因子表达的影响 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 金属基质蛋白酶多态性与白内障易感性的初步研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 收集临床资料 |
| 1.4.2 外周血DNA提取 |
| 1.4.3 基因型检测 |
| 1.4.4 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 患者一般资料 |
| 2.2 HWE平衡检验 |
| 2.3 MMP-2基因rs243865位点基因型分布 |
| 2.4 MMP-2的C/T等位基因分布频率的比较 |
| 2.5 MMP-2基因rs243865位点遗传模型分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文文章 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）高钙状态下衰老标记蛋白30对人晶状体上皮细胞系SRA01/04的保护作用（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 5. 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（3）急性氧化应激状态下SMP30的变化对人晶状体上皮细胞的生长及氧化活性的影响（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1 SRA01/04生长状况佳 |
| 2.2 不同浓度下H_2O_2处理细胞后存活率比较 |
| 2.3 慢病毒感染SRA01/04细胞 |
| 2.4 成功构建SMP30过表达及沉默SRA01/04稳定株细胞 |
| 2.5 急性氧化应激初期转染细胞模型的成功建立 |
| 2.6 CCK-8法检测细胞活力 |
| 2.7 Brdu法检测SRA01/04细胞增殖能力 |
| 2.8 流式细胞仪测定PI FACS细胞周期 |
| 2.9 Annexin V APC信号单染法测定凋亡率 |
| 2.10 使用SOD测定试剂盒(WST-1法)检测各组细胞抗氧化能力 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）不同波长LED光对晶状体影响的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、白光LED对于大鼠晶状体的影响的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要仪器设备及耗材 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 HE染色结果 |
| 1.2.2 caspase-3 mRNA与蛋白表达结果 |
| 1.2.3 P21 mRNA及蛋白检测结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 LED光的光生物安全性 |
| 1.3.2 蓝光危害 |
| 1.3.3 LED光活体照射后对晶状体上皮细胞形态的影响 |
| 1.3.4 LED光对晶状体上皮细胞内caspase-3表达的影响 |
| 1.3.5 LED 光对晶状体上皮细胞内 P21~(waf1/cip1)表达的影响 |
| 1.4 小结 |
| 二、不同波长LED光对晶状体氧化损伤的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备及耗材 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 晶状体HE染色结果 |
| 2.2.2 晶状体内部MDA含量检测 |
| 2.2.3 晶状体内部SOD活力检测 |
| 2.2.4 晶状体内部GSH-Px活力检测 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 白光LED的光谱组成及光照方案的确定 |
| 2.3.2 LED光与蓝光危害 |
| 2.3.3 氧化应激与白内障 |
| 2.3.4 氧化应激刺激下晶状体内氧化-抗氧化体系失衡 |
| 2.3.5 不同波长的LED光对大鼠晶状体影响的HE染色观察 |
| 2.3.6 不同波长LED光对晶状体内氧化-抗氧化系统的影响 |
| 2.3.7 对于短波长可见光线对晶状体的影响的思考 |
| 2.3.8 关于LED光色温大小与晶状体光损伤效应之间关系 |
| 2.4 小结 |
| 三、硫辛酸对LED光照射后晶状体内MDA含量的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器设备及耗材 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 晶状体内MDA、SOD及GSH-Px比较 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 研究白内障发病机制及预防手段的重要意义 |
| 3.3.2 氧化损伤与白内障的预防 |
| 3.3.3 硫辛酸的特性及其抗氧化损伤效应 |
| 3.3.4 硫辛酸的抗晶状体氧化损伤作用 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 LED光源对视觉系统的生物安全性分析 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）EphA2在地塞米松作用的人晶状体上皮细胞中的表达变化及其意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一部分 地塞米松对人晶状体上皮细胞增殖、凋亡和EphA2表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 体外培养的人晶状体上皮细胞HLE-B3形态观察 |
| 2.2 不同浓度地塞米松对HLE-B3存活率的影响 |
| 2.3 Tunel法检测HLE-B3凋亡 |
| 2.4 Annexin V -APC/PI法检测细胞凋亡 |
| 2.5 Western blot检测EphA2蛋白的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 人EphA2基因慢病毒表达载体构建及体外转染人晶状体上皮细胞的实验研究 |
| 第一节 人EphA2基因表达载体构建 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 第二节 EphA2基因表达载体的慢病毒包装及滴度测定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 第三节 人EphA2表达载体转染人晶状体上皮细胞的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 EphA2基因过表达对HLE-B3和地塞米松作用的HLE-B3增殖及凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 CCK-8检测存活率 |
| 2.2 Tunel检测凋亡指数 |
| 2.3 AnnexinV -APC/PI双染后流式细胞仪检测凋亡率 |
| 2.4 EphA2基因过表达对正常HLE-B3和地塞米松作用的HLE-B3细胞中BCL-2/BAX和Caspase-3蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 糖皮质激素性白内障研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（6）人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 2结果 |
| 3讨论 |
（7）地塞米松对人晶状体上皮细胞中波形蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 2结果 |
| 3讨论 |
（8）波形蛋白与糖皮质激素性白内障的关系（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 糖皮质激素性白内障 |
| 1.1 GIC的特点 |
| 1.2 GIC形态学和组织学特点 |
| 2 波形蛋白与GIC |
| 2.1 波形蛋白结构与功能 |
| 2.2 波形蛋白在GIC形成过程中的作用 |
| 3 结论及研究前景 |
（9）波形蛋白与糖皮质激素性白内障发病关系的研究进展（论文提纲范文）
| 前言 |
| 1 波形蛋白概述 |
| 2 糖皮质激素性白内障与糖皮质激素受体 |
| 2.1 糖皮质激素性白内障 |
| 2.1.1氧化-构象学说 |
| 2.1.2 蛋白复合物形成学说 |
| 2.1.3 细胞粘附分子异常学说 |
| 2.2 糖皮质激素受体 |
| 3 糖皮质激素受体介导的波形蛋白 |
| 4 展望 |
（10）年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子和启动子的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 研究背景 |
| 研究材料 |
| 研究方法 |
| 研究结果 |
| 一 年龄相关性皮质性白内障组和对照组临床资料 |
| 二 Vimentin 基因外显子序列检测结果 |
| 三 Vimentin 基因5'UTR 检测结果 |
| 四 Vimentin 基因启动子序列检测结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
四、波形蛋白在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及其意义（论文参考文献）
- [1]内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究[D]. 董媛. 山东大学, 2019(02)
- [2]高钙状态下衰老标记蛋白30对人晶状体上皮细胞系SRA01/04的保护作用[D]. 李松蔓. 广西医科大学, 2019(08)
- [3]急性氧化应激状态下SMP30的变化对人晶状体上皮细胞的生长及氧化活性的影响[D]. 韩子豪. 广西医科大学, 2019(08)
- [4]不同波长LED光对晶状体影响的初步研究[D]. 刘铁刚. 天津医科大学, 2019(02)
- [5]EphA2在地塞米松作用的人晶状体上皮细胞中的表达变化及其意义[D]. 马成霞. 郑州大学, 2018(12)
- [6]人原代晶状体上皮细胞中PEDF基因下调引起波形蛋白和αB-晶状体蛋白含量的变化[J]. 杨静. 眼科新进展, 2015(08)
- [7]地塞米松对人晶状体上皮细胞中波形蛋白表达的影响[J]. 葛佳佳,苏胜,刘平. 眼科新进展, 2015(05)
- [8]波形蛋白与糖皮质激素性白内障的关系[J]. 葛佳佳,苏胜,刘平. 国际眼科杂志, 2014(11)
- [9]波形蛋白与糖皮质激素性白内障发病关系的研究进展[J]. 徐莺歌,刘冬瑞,刘平,张红. 现代生物医学进展, 2014(24)
- [10]年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子和启动子的研究[D]. 王慧. 苏州大学, 2011(06)