一、鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察（论文文献综述）
王钊[1]（2016）在《洪湖碘泡虫ELISA检测方法的建立与初步应用》文中研究指明洪湖碘泡虫造成异育银鲫大规模病变死亡,带来巨大经济损失,因此对该寄生虫病的早期检测尤为重要,但目前并没有洪湖碘泡虫的早期检测方法。本研究精确鉴定了一例洪湖碘泡虫,采用化学方法在不破坏虫体免疫学性质的前提下进行了纯化,并制备了虫体可溶性成分与不溶性成分,借助免疫学手段,初步探索洪湖碘泡虫的免疫原性,根据相关抗原特性建立相应的ELISA检测方法。并以此作为基础,对病鱼进行了实际检测。通过对虫体形态学进行观察加以生物信息学分析后,鉴定了一例洪湖碘泡虫。采用极性有机溶剂洗脱离心法,分离纯化得到纯净的洪湖碘泡虫。经过液氮与温浴反复冻融、超声波破碎提取虫体可溶性蛋白与不溶性抗原成分。两种抗原分别免疫小鼠与豚鼠制备得到多克隆抗体,分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、SDS-PAGE蛋白电泳、间接免疫荧光试验（IFAT）对多克隆抗体的免疫学性质进行分析。ELISA测定可溶性成分攻毒组小鼠多抗血清与豚鼠多抗血清效价均达到1:20000以上。不溶成分攻毒组小鼠与豚鼠的多抗血清效价均小于1:50。SDS-PAGE蛋白电泳显示可溶蛋白主要分布于10kDa200kDa,不溶成分无明显分布。不溶性成分多抗血清的IFAT荧光微弱且不明显;使用可溶性成分免疫后收集的多抗血清对孢子进行免疫荧光定位试验,结果显示荧光强烈的部分主要位于洪湖碘泡虫的孢原质内部,少部分分布于孢子壳瓣处,显示了孢子的大多数抗原所处位置;IFAT显示本血清与瓶囊碘泡虫和武汉单极虫及其属内某些种类存在着微弱的交叉反应。使用所制多抗作为构建ELISA检测方法的基本检测试剂,对洪湖碘泡虫双抗体夹心ELISA检测方法的条件进行了摸索与优化。通过方阵滴定法确定豚鼠抗洪湖碘泡虫可溶性抗原多抗的最佳工作浓度为3.09μg/mL（1:200）,小鼠抗洪湖碘泡虫可溶性抗原多抗的最佳工作浓度为10.3μg/mL（1:800）,封闭液为5%脱脂牛奶37℃作用90min,HRP标记的酶标二抗工作条件:浓度为1:2000在37℃作用30min,特异性实验表明:与锦鲤疱疹病毒、维氏气单胞菌、纤毛虫、指环虫不存在交叉反应,但与武汉单极虫、瓶囊碘泡虫存在微弱的交叉反应。重复性试验表明:该多抗血清批内重复实验变异系数小于8%,批间变异系数小于9%。证明建立的方法具有良好的可重复性。临床初步应用显示应用PCR方法与建立的双抗体夹心ELISA方法对吉林省双阳某水库、吉林市某水库、梅河口某水库养殖渔场共90尾10周龄异育银鲫鳃组织研磨提取液进行检测,结果显示阳性符合率达到80%,阴性符合率达到100%。证明建立的双抗体夹心ELISA方法具有一定的可应用性,不但为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏及应用广泛的洪湖碘泡虫检测方法,而且为未来洪湖碘泡虫新型免疫学检测方法的研究提供了坚实的理论依据。
贾洛[2]（2015）在《洪湖碘泡虫抗体的制备及其特异性研究》文中研究指明本研究对异育银鲫“喉孢子虫病”病原—洪湖碘泡虫（Myxobolus honghuensis Liu et Gu,2012）的免疫原性进行了一系列研究,制备出多克隆抗体和单克隆抗体。旨在为建立准确、高效的洪湖碘泡虫免疫学检测方法提供有效工具以及疫苗的开发提供重要候选抗原信息,从而为“喉孢子虫病”的免疫学防控打下坚实基础。本研究的主要结果如下:1.洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析本研究利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFAT）、免疫印迹分析（Western blotting）对多克隆抗体的免疫特性进行分析。结果显示,间接ELISA法测定多抗血清的效价为1:25600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印记分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子量大小分别约为180 k Da,130 k Da,78 k Da,75 k Da,62 k Da,52 k Da,42 k Da,36 k Da,34 k Da,28 k Da。该多抗血清与碘泡虫属及单极虫属的一些粘孢子虫种类存在一定程度的交叉反应。2.洪湖碘泡虫壳瓣和极丝单克隆抗体的制备与鉴定本研究利用B淋巴细胞杂交瘤技术最终筛选得到两株有效抗洪湖碘泡虫的单克隆抗体1C7和3B7。结果显示,间接ELISA法测定效价分别为1:124000、1:248000,1C7和3B7的亚型分别为Ig M和Ig G1;IFAT定位抗原:单抗1C7特异识别极丝,单抗3B7特异识别成熟孢子壳瓣,两者均不与虫体其它结构发生反应;Western blotting显示:1C7结合抗原的相对分子质量约为130Kda和180Kda,3B7结合抗原的相对分子质量约为28Kda。通过对两株单抗所结合的蛋白进行MS质谱分析并与蛋白质数据库（Uni Prot）比对的结果显示:1C7对应的蛋白可能为BCLF1蛋白（Bcl-2-associated transcription factor 1）,3B7对应的蛋白为ANGIAOTTR蛋白。
顾伟[3]（2012）在《江苏地区鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类研究》文中指出江苏是全国鲫鱼主要养殖地区之一,但自90年代起就一直遭受粘孢子虫病害的困扰,给养殖户造成了极大的经济损失,严重影响了江苏鲫鱼养殖业的发展。本研究通过对江苏地区鲫鱼寄生粘孢子虫种类的调查和分类研究,并建立洪湖碘泡虫的一种PCR快速检测方法,旨在为粘孢子虫的分类和生活史研究提供一些理论基础,并为鲫鱼粘孢子虫病防治提供一定的理论依据。1.鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类。作者在2011年7月到2012年4月期间,在江苏无锡、盐城、大丰、射阳、滨海等地区池塘养殖鲫鱼的鳃部、喉部、体表共检测到6种粘孢子虫,并通过形态学和18S rDNA序列的比对,对其进行分类鉴定,结果如下：卡特碘泡虫（M. cultus Yokoyama, Ogawa&Wakabayashi,1995）、吴李碘泡虫（M. wulii Landsberg&Lom,1991）、瓶囊碘泡虫（M. ampullicapsulatus Zhao等,2008）、洪湖碘泡虫（M. Honghuensis Liu等,2011）、多涅茨尾孢虫（Henneguya doneci Schhulman,1962）、武汉单极虫（Thelohanellus wuhanensis Xiao&Chen,1993）,其中以由喉部寄生的洪湖碘泡虫引起的“喉孢子虫病”和由肝胰脏寄生的吴李碘泡虫引起的“腹孢子病”的危害最为严重,并利用NJ/ML/MP法构建粘孢子虫的系统发育树,分析验证了5种粘孢子虫的系统发育地位,补充了6种粘孢子虫形态学和5种粘孢子虫的18S rDNA信息。2.鲫鱼养殖塘放射孢子虫种类的调查和分类。为了掌握鲫鱼粘孢子虫的感染和传播途径,作者在2011年7月到2012年4月期间,在江苏常州、溧阳等地区暴发过粘孢子虫病的鲫鱼养殖塘开展媒介宿主和放射孢子虫种类调查。在池塘底泥中采集寡毛类,并从苏氏尾鳃蚓中发现了4种具有不同形态特征的放射孢子,即：Echinactinomyxon type1、Echinactinomyxon type2、Triactinomyxon type、Raabeia type.将这4种类型放射孢子虫的形态学数据与国内外文献中已记述的放射孢子虫的作比较,发现分别在寄生宿主、形态大小、等方面均有明显差异,因此,这4种放射孢子虫为国内外首次报道。利用18S rDNA序列比对的方法确定了Echinactinomyxon1为与鲫鱼肝部感染的吴李碘泡虫对应的放射孢子虫。3.洪湖碘泡虫巢式PCR检测技术。用无菌蒸馏水稀释到不同倍数（100,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7）的洪湖碘泡虫基因组DNA为模板,利用粘孢子虫18S rDNA通用引物[ERIB1（ACCTGGTTGATCCTG CCAG）和ERIB10（CTTCCGCAGGTTCACCTACGG）]作为外引物,洪湖碘泡虫特异引物[Nest-F （TCTTGATGCGGTGAGTGG）和Nest-R （ACATTACA CCCTGAGCGAG）]为内引物进行巢氏PCR,并做好空白对照,反应结束后将首轮和二轮PCR产物各取5μL混合琼脂糖电泳,结果显示：以ERIB1&10为引物单轮PCR反应仅能检测出稀释到10-1基因组DNA样品,而以Nest-F&R反应能检测出稀释到10-2和10-3基因组DNA样品,分别较ERIB1&10单轮PCR和Nest-F&R单轮PCR反应检测灵敏度高出2-3个数量级。
竹攸汀[4]（2012）在《异育银鲫皮肤粘孢子虫病的病原和组织病理研究》文中研究表明异育银鲫（Carassius auratus gibelio）是银鲫卵子与异源精子所产的后代。江苏省扬州地区是生产异育银鲫鱼苗鱼种的主要地区之一，每年为异育银鲫成鱼养殖地区提供大量的鱼苗和鱼种。异育银鲫繁殖期为每年的4月下旬至5月中旬，近几年的6月上旬左右起，该地区培育过程中的异育银鲫鱼苗体表会出现一种由粘孢子虫寄生而出现孢囊的疾病，发病使得鱼体变形、消瘦、游动困难，严重时导致鱼苗大量死亡，累积死亡率约在10%-60%，鱼苗死亡以及病鱼销售困难给鱼苗养殖户带来巨大的经济损失。因此有必要开展该病的病原和病理研究，为进一步的研究和防治该病的发生提供基础。为了确定粘孢子虫在何种条件下进行形态学观察和测量时最精确，本文以引起该粘孢子虫病的病原粘孢子虫作为样本，将其新鲜成熟孢子用生理盐水制成的水浸片作为对照组，将蒸馏水制成的新鲜孢子水浸片，中性甲醛、70%酒精、95%酒精、Bouin’s液、2.5%戊二醛、A.F.F液和G.A.F液保存24小时后孢子的孢子长、宽、厚、极囊长和宽的测量数据分别与对照组进行统计学分析，结果表明，蒸馏水对孢子的形态略微膨胀，但影响不大；所有的固定液均会对孢子的形态产生影响，中性甲醛、酒精、Bouin’s液和2.5%戊二醛会使孢子产生一定收缩，95%酒精使孢子收缩最严重，70%酒精和Bouin’s液次之；2.5%戊二醛对于保存后的粘孢子虫的形态影响最小，最适于保存孢子；中性甲醛对孢子形态的影响稍大于2.5%戊二醛，但在没有条件使用2.5%戊二醛时，也可用中性甲醛替代。在确定了鉴定方法后，通过光镜、扫描电镜和18S rDNA序列对比，确定该病原粘孢子虫为武汉单极虫（Thelohanellus wuhanensis），并对其进行了形态学重描述和系统发育分析。成熟孢子壳面观为瓜子状，前端狭窄而尖锐，后部钝圆，两片壳瓣前端形状不对称，其中一个壳瓣前端有乳头状突起，缝面观为厚梭形，缝脊直，孢子壳瓣底部内侧有1-4个“V”形褶皱，部分孢子后部包围有膜状鞘，膜状鞘两侧起始的位置不同，离孢子前端的垂直距离为5.03-16.69（10.37±2.36）μm。极囊1个，近似球形，位于孢子前端，极丝7-10圈。2个圆形或近三角形的极囊核，分别位于极囊后部左右两侧。Lugol’s碘液染色后嗜碘泡呈棕黄色，形状为圆形或椭圆形。孢子的测量结果：孢子长21.92-26.93（24.55±0.95）μm，孢子宽11.43-15.48（13.72±0.98）μm，孢子厚10.83-14.14（11.80±0.45）μm；极囊长9.64-12.79（11.54±0.68）μm，极囊宽8.14-10.28（9.12±0.45）μm，极丝长158.49-179.22（170.71±5.67）μm（n=20），膜状鞘外表面距孢子壳瓣表面最远距离为1.73-4.39（2.73±0.60）μm。亚甲基蓝染色表明极丝为中空管状。获得了部分18S rDNA序列，GenBank登录号为JQ088179，经18S rDNA序列分析对比，与已报道的T. wuhanensis[HQ613410]和[AY165181]相似度分别为99.87%和97.36%。本文依据形态学以及18S rDNA序列信息确定了该孢子虫的分类地位。系统发育分析显示，单极虫与碘泡虫具有非常近的亲缘关系，将单极虫属与碘泡虫属二者归属于碘泡科的分类方法更合理。5月下旬至6月中旬为发病初期，此时孢囊很小，仅导致皮肤微微隆起。随后孢囊开始增大，表面分布有少量黑色斑点。孢囊为椭圆形，位于皮肤真皮层的疏松结缔组织中，孢囊周围的疏松结缔组织增生，其中可见较多的黑色素细胞。孢囊膜为由结缔组织形成的非细胞结构。早期时，产孢体多位于孢囊膜附近，随着发展，产孢体进入孢囊内，位于内部的产孢体会比孢囊膜附近的产孢体更早地形成成熟孢子。成熟孢子由双产孢体或四核产孢体发育形成。7月中下旬至8月中旬为发病高峰期，此时孢囊饱满，表面有大而密集的黑色斑点，孢囊直径最大超过1.7mm，孢囊数最多可达30个以上。除皮肤和鳍外，其它组织器官未发现孢囊和孢子。较大的孢囊导致鳞片弯曲，有的孢囊也会受鳞片挤压而变形。有时两个孢囊相互靠近而融合。孢囊周围增生的疏松结缔组织中存在毛细血管增生现象。黑色素细胞较初期更多。孢囊附近存在一种未知的团状物。孢囊内存在大量成熟孢子，但孢囊膜附近仍存在产孢体。约8月中旬开始疾病进入消退期，孢囊开始逐渐萎缩、消失。此时孢囊周围存在较之前更多更密集的黑色素细胞，导致孢囊表面颜色变黑。孢囊中只有成熟孢子。随着疾病消退，孢囊膜消失，由上皮细胞取而代之。到消退晚期，上皮细胞膜出现缺口，孢子从缺口中流出。孢子消失后，孢囊仍然会存在一段时间。孢囊消失后，增生的结缔组织、黑色素细胞以及未知团状物仍存在。消退后，结缔组织中仍可见游离孢子。到9月上中旬，孢囊消失，但尚可见病灶迹痕。
徐海圣,王淑霞[5]（2001）在《鲢碘泡虫孢子超微结构的研究》文中研究指明本文对白鲢疯狂病的病原体———鲢碘泡虫孢子的超微结构进行了观察 ,发现其孢子由孢壳、极囊及孢质组成。孢壳由两壳瓣组成 ,壳瓣在缝脊处加厚 ,两者通过微管连接 ;孢子具有两个大小不等的梨形极囊 ,极丝 6 7圈沿极囊纵轴螺旋缠绕在基质周围 ,极囊的前端处有极囊帽 ,其宽而平部分罩住极囊前端 ,此处极囊壁具有极丝排出管 ;极囊壁由“暗 亮 暗”三层组成 ,外层周围环绕一层均匀的电子致密物质 ;孢质中具有两个细胞核 ,还有线粒体、内质网、嗜碘泡等细胞器 ,大量的小球状电子致密颗粒集中在孢质及极囊周围
徐海圣,王淑霞[6]（2000）在《鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察》文中提出
鲁义善,汪建国[7]（2000）在《粘孢子虫（粘体门:粘孢子纲）的研究现状》文中进行了进一步梳理
徐海圣,王淑霞,吴惠仙,杨明坚,吴宝华[8]（1999）在《鲢疯狂病病原体鲢碘泡虫孢子的超微结构观察》文中研究表明本文对鲢碘泡虫孢子的超微结构进行了观察,发现其孢子由孢壳、极囊及孢质组成.孢壳由两壳瓣组成,壳瓣在连接处加厚,两者通过微管连接.孢子具有两个大小不等的极囊,极丝6～7圈螺旋缠绕在基质周围,平时被极囊帽所阻止;当极囊帽打开时,通过排出管排出池子外.极囊壁由“暗-亮-暗”三层组成,外层周围环绕一层均匀的电子致密物质.孢质中具有两个核,还有线粒体、内质网等细胞器.大量的小球状电子致密颗粒集中在抱质及极囊周围.
黄琪琰[9]（1996）在《中国水产动物疾病学研究进展》文中研究表明中国水产动物疾病学研究进展黄琪琰（上海水产大学，２０００９０）关键词水产动物，病理学，中国ＴＨＥＡＤＶＡＮＣＥＭＥＮＴＯＦＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡＬＲＥＳＥＡＲＣＨＥＳＯＮＡＱＵＡＴＩＣＡＮＩＭＡＬＳＩＮＣＨＩＮＡ￥ＨｕａｎｇＱｉｙａｎ(Ｓｈａｎｇｈａ...
吴宝华,蔡晓红[10]（1993）在《鲢疯狂病病原体鲢碘泡虫孢子形成各阶段的观察研究》文中研究指明链碘泡虫是鲢疯狂病的病原体。本文报道鲢碘泡虫营养体细胞的核型、各期有丝分裂相、孢子形成过程的早期、即二个生殖细胞的联合以及孢子的产生。
二、鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察（论文提纲范文）
（1）洪湖碘泡虫ELISA检测方法的建立与初步应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1 碘泡虫简介 |
| 2 碘泡虫检测方法研究进展 |
| 3 洪湖碘泡虫研究进展 |
| 4 本实验研究目的与意义 |
| 第二章 虫种鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 多抗制备及其免疫性质分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 ELISA检测条件的摸索与初步应用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（2）洪湖碘泡虫抗体的制备及其特异性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 粘体动物研究概况 |
| 1.1 粘体动物及相关病害简述 |
| 1.2 异育银鲫“喉孢子虫病”及其病原的研究概述 |
| 2 粘体动物免疫学研究概况 |
| 2.1 粘体动物抗原特性的研究 |
| 2.2 粘体动物壳瓣和极丝的抗原研究概况 |
| 3 粘体动物—宿主的相互作用 |
| 3.1 非特异性免疫反应 |
| 3.1.1 细胞免疫 |
| 3.1.2 体液免疫 |
| 3.2 特异性体液免疫 |
| 4 粘体动物病害的免疫防治 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 第二章 洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 病鱼采集 |
| 1.1.2 主要试剂和材料 |
| 1.1.3 主要缓冲液的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 洪湖碘泡虫成熟孢子的分离纯化 |
| 1.2.2 可溶性蛋白的制备及SDS-PAGE分析 |
| 1.2.3 免疫小鼠与血清收集 |
| 1.2.4 多抗血清效价的测定 |
| 1.2.5 多克隆抗体的Western blotting分析 |
| 1.2.6 间接免疫荧光（IFAT）试验 |
| 1.2.6.1 IFAT抗原定位 |
| 1.2.6.2 多克隆抗体的交叉反应试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 洪湖碘泡虫的分离纯化 |
| 2.2 可溶性蛋白制备及SDS-PAGE分析 |
| 2.3 多抗血清的效价测定 |
| 2.4 多抗免疫印迹分析 |
| 2.5 间接免疫荧光（IFAT）抗原定位 |
| 2.6 多克隆抗体的交叉反应试验 |
| 3 讨论 |
| 第三章 洪湖碘泡虫壳瓣和极丝单克隆抗体的制备与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 病鱼采集 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 主要试剂和材料 |
| 1.1.4 主要培养基及其配制 |
| 1.1.5 主要缓冲液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 成熟孢子的分离纯化 |
| 1.2.2 可溶性蛋白的制备 |
| 1.2.3 免疫小鼠 |
| 1.2.4 细胞融合 |
| 1.2.4.1 饲养细胞的制备 |
| 1.2.4.2 脾细胞的制备 |
| 1.2.4.3 骨髓瘤细胞的准备 |
| 1.2.4.4 细胞融合 |
| 1.2.4.5 细胞培养 |
| 1.2.5 阳性克隆的筛选和亚克隆 |
| 1.2.5.1 ELISA检测上清效价 |
| 1.2.5.2 杂交瘤细胞的亚克隆 |
| 1.2.5.3 杂交瘤细胞的冻存和复苏 |
| 1.2.6 单克隆抗体的大量制备和纯化 |
| 1.2.6.1 小鼠腹水的制备及收集 |
| 1.2.6.2 腹水的纯化 |
| 1.2.7 单克隆抗体亚类的鉴定 |
| 1.2.8 间接酶联免疫吸附法（ELISA）测定抗体的效价 |
| 1.2.9 利用间接免疫荧光（IFAT）定位虫体抗原 |
| 1.2.10 单克隆抗体特异性评价 |
| 1.2.11 单克隆抗体的Western Blotting分析 |
| 1.2.12 利用质谱技术分析单抗针对抗原决定簇的蛋白组成 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 杂交瘤细胞的筛选和杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.2 单克隆抗体效价测定及亚类鉴定 |
| 2.3 间接免疫荧光定位抗原—成熟孢子及一种放射孢子虫 |
| 2.4 单克隆抗体的免疫印记试验 |
| 2.5 利用质谱技术分析单抗所针对抗原决定簇的蛋白组成 |
| 2.6 单克隆抗体的特异性评价（交叉反应） |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）江苏地区鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 引言 |
| 1 粘孢子虫概述 |
| 1.1 粘孢子虫简介 |
| 1.2 粘孢子虫病 |
| 1.3 常见的粘孢子虫病 |
| 1.4 粘孢子虫病的防控 |
| 2 粘孢子虫分类地位 |
| 3 粘体动物分类系统 |
| 4 粘孢子虫的分类方法 |
| 4.1 形态学分类方法 |
| 4.2 分子分类学方法 |
| 5 放射孢子虫概述 |
| 6 粘孢子虫生活史研究进展 |
| 第二章 江苏鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类 |
| 1 材料方法 |
| 1.1 粘孢子虫样本的采集 |
| 1.2 粘孢子虫的形态观察,鉴定,保存 |
| 1.3 形态学数据的测量 |
| 1.4 形态学描述 |
| 1.5 分子分析 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 卡特碘泡虫 |
| 3.2 吴李碘泡虫 |
| 3.3 瓶囊碘泡虫 |
| 3.4 洪湖碘泡虫 |
| 3.5 多涅茨尾孢虫 |
| 3.6 武汉单极虫 |
| 3.7 系统发育分析 |
| 4 小结 |
| 第三章 鲫鱼养殖塘放射孢子虫种类的调查与分类 |
| 1 材料方法 |
| 1.1 放射孢子虫的采集 |
| 1.2 放射孢子虫的光镜观察 |
| 1.3 基因组DNA提取 |
| 1.4 18S rDNA扩增,测序 |
| 1.5 苏氏尾鳃蚓的石蜡组织切片 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 Echinactinomyxon type 1 |
| 2.2 Echinactinomyxon type 2 |
| 2.3 Triactinomyxon type |
| 2.4 Raabeia type |
| 3 小结 |
| 第四章 洪湖碘泡虫巢式PCR检测技术 |
| 1 材料方法 |
| 1.1 洪湖碘泡虫基因组DNA提取 |
| 1.2 巢式PCR引物设计 |
| 1.3 引物特异性检验 |
| 1.4 灵敏度检验 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 特异性检验 |
| 2.2 灵敏度检验 |
| 3 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间参与学术会议及发表的学术论文 |
| 致谢 |
（4）异育银鲫皮肤粘孢子虫病的病原和组织病理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 粘孢子虫的经典分类学研究 |
| 1.1 粘孢子虫的分类地位 |
| 1.2 粘孢子纲分类的发展 |
| 2 粘孢子虫病害学和组织病理学的研究现状 |
| 3 粘孢子虫生活史研究 |
| 3.1 对粘孢子虫中间寄主的研究 |
| 3.2 粘孢子虫孢子寄生在鱼类体内的发育状况 |
| 3.2.1 “未明血液生物体”（“UBO”）的发现和证实 |
| 3.2.2 脑粘体虫和吸鱼粘体虫生活史的发现 |
| 4 粘孢子虫的免疫学研究现状 |
| 5 展望 |
| 5.1 分子生物学方法在解决粘孢子虫分类地位和分类系统上的运用 |
| 5.2 DNA 序列分析在解决中间寄主问题上的运用 |
| 5.3 生物保存技术和体外培养技术在研究粘孢子虫上的运用 |
| 6 本论文研究的目的及意义 |
| 第一章 粘孢子虫标本固定液的筛选 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病鱼采集 |
| 1.2 部分保存液的配制方法 |
| 1.3 标本的保存 |
| 1.4 标本的测量 |
| 1.5 测得数据的统计和显着性分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 新鲜标本以及不同固定液固定 24 小时后的统计和分析 |
| 2.2 不同固定液固定后的孢子形态 |
| 2.2.1 新鲜标本和固定 24 小时后的孢子长 |
| 2.2.2 新鲜标本和固定 24 小时后的孢子宽 |
| 2.2.3 新鲜标本和固定 24 小时后的孢子厚 |
| 2.2.4 新鲜标本和固定 24 小时后的极囊长 |
| 2.2.5 新鲜标本和固定 24 小时后的极囊宽 |
| 3 讨论 |
| 第二章 武汉单极虫（粘体门，双壳目）的重描述以及基于 18S rDNA 序列的系统发育分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病鱼采集 |
| 1.2 部分分子生物学实验试剂配制方法 |
| 1.3 病原形态学观察 |
| 1.3.1 显微镜观察 |
| 1.3.2 扫描电镜观察 |
| 1.4 病原的分子生物学分析 |
| 1.4.1 DNA 提取 |
| 1.4.2 使用引物 |
| 1.4.3 DNA 扩增和凝胶电泳 |
| 1.4.4 PCR 产物回收、连接、克隆和测序 |
| 1.4.5 18S rDNA 分子系统树的构建和分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 病鱼症状 |
| 2.2 粘孢子虫的形态结构 |
| 2.2.1 光镜观察 |
| 2.2.2 扫描电镜观察 |
| 2.3 分子生物学鉴定和分析 |
| 2.3.1 PCR 扩增及序列测定 |
| 2.3.2 分子生物学分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 形态学研究以及种类鉴定 |
| 3.2 分子生物学分析 |
| 3.3 成熟孢子的感染途径 |
| 第三章 武汉单极虫寄生后异育银鲫的组织病理变化 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病鱼采集 |
| 1.2 部分实验试剂配制方法 |
| 1.3 实验材料的采集和固定 |
| 1.4 孢子形成过程的观察 |
| 1.5 组织切片制作、染色及观察拍照 |
| 2 结果 |
| 2.1 发病初期的症状及组织病理变化 |
| 2.1.1 病鱼病症 |
| 2.1.2 组织病理变化 |
| 2.1.3 成熟孢子的形成过程 |
| 2.2 发病高峰期的症状及组织病理变化 |
| 2.2.1 病鱼病症 |
| 2.2.2 组织病理变化 |
| 2.3 疾病消退期的症状及组织病理变化 |
| 2.3.1 病鱼病症 |
| 2.3.2 组织病理变化 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（5）鲢碘泡虫孢子超微结构的研究（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（7）粘孢子虫（粘体门:粘孢子纲）的研究现状（论文提纲范文）
| 1 粘孢子虫的分类地位及分类系统 |
| 1.1 分类地位 |
| 1.2 分类系统 |
| 2 粘孢子虫的生活史 |
| 3 粘孢子虫病及其免疫学 |
| 4 展望 |
| 4.1 分子免疫学技术的应用 |
| 4.2 DNA分子杂交方法的应用 |
| 4.3 分子系统学方法的应用 |
（10）鲢疯狂病病原体鲢碘泡虫孢子形成各阶段的观察研究（论文提纲范文）
| 一、营养体细胞的核型和有丝分裂 |
| 1. 鲢碘泡虫营养体细胞的核型: |
| 2. 核的各期有丝分裂相: |
| 二、鲢碘泡虫孢子形成过程的早期和孢子的产生 |
| 1. 孢子形成过程的早期: |
| 2. 孢子的产生: |
| 3. 孢子形成: |
| 三、 |
| 四、 |
四、鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察（论文参考文献）
- [1]洪湖碘泡虫ELISA检测方法的建立与初步应用[D]. 王钊. 吉林农业大学, 2016(02)
- [2]洪湖碘泡虫抗体的制备及其特异性研究[D]. 贾洛. 华中农业大学, 2015(02)
- [3]江苏地区鲫鱼寄生粘孢子虫种类调查与分类研究[D]. 顾伟. 南京农业大学, 2012(01)
- [4]异育银鲫皮肤粘孢子虫病的病原和组织病理研究[D]. 竹攸汀. 上海海洋大学, 2012(03)
- [5]鲢碘泡虫孢子超微结构的研究[J]. 徐海圣,王淑霞. 上海交通大学学报(农业科学版), 2001(01)
- [6]鲢碘泡虫营养体细胞化学的初步观察[J]. 徐海圣,王淑霞. 浙江海洋学院学报(自然科学版), 2000(04)
- [7]粘孢子虫（粘体门:粘孢子纲）的研究现状[J]. 鲁义善,汪建国. 中国水产科学, 2000(01)
- [8]鲢疯狂病病原体鲢碘泡虫孢子的超微结构观察[A]. 徐海圣,王淑霞,吴惠仙,杨明坚,吴宝华. 中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集, 1999
- [9]中国水产动物疾病学研究进展[J]. 黄琪琰. 水产学报, 1996(01)
- [10]鲢疯狂病病原体鲢碘泡虫孢子形成各阶段的观察研究[J]. 吴宝华,蔡晓红. 动物学报, 1993(01)