一、THE ROLE OF IGF-1 GENE EXPRESSION ABNORMALITY IN PATHOGENESIS OF DIABETIC PERIPHERAL NEUROPATHY（论文文献综述）
刘琼[1]（2021）在《六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的靶效代谢组学研究》文中提出研究背景糖尿病周围神经病变（Diabetic peripheral neuropathy,DPN）,属中医“消渴痹症”的范畴,是糖尿病最常见的慢性并发症;随着病情进展,约有一半以上的成年患者遭受DPN,出现如感觉消失,麻木,疼痛等症状,严重影响患者的生活质量。近年来,随着DPN检查普及率的升高和器械检查灵敏度的不断改进,DPN的发病率也逐渐升高。目前DPN的发病机制复杂且不明确,其中高血糖是主要病因,其他主要涉及氧化应激,免疫机制,代谢异常等。目前,现代医学对DPN的治疗,暂无明确的特效药,治疗目的主要是稳定血糖,改善症状。中医药对DPN的治疗,基于辨证论治的基本特点,从病因病机出发,如阴虚燥热、瘀血阻络、脾虚气弱、肾气亏虚等;辨证其证型,如气虚血瘀证、阴虚血瘀证、痰瘀阻络证、肝肾亏虚证、阳虚寒凝证、湿热阻络证等;从而选择不同的方药治疗,如补阳还五汤、黄芪桂枝五物汤、当归四逆汤等,已取得了较好的疗效;因此,中医药治疗DPN具有副作用少,多靶点、多通路等特点,可满足临床患者的需要。本研究前期运用网络药理学等方法,通过国际公认的疾病蛋白数据库建立了 2型糖尿病周围神经病变的复杂分子相互作用网络,然后运用“模块药理学”、“种子筛选方法”、“网络控制”、“处方优化”等方法,筛选出中药复方;再结合临床经验,进而确定其临床使用剂量,最终形成“六味络痹颗粒”,拟定具有补肾、活血、清热、化瘀、通络等功效,以改善糖尿病周围神经病变的临床症状和其神经传导功能障碍,进而提高患者的生活质量。研究目的本研究主要观察了六味络痹颗粒在2型糖尿病周围神经病变的db/db小鼠模型上,对神经传导功能障碍方面的影响;然后运用代谢组学技术检测给药第12周小鼠血清中靶标代谢物的浓度,找到六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的代谢物靶点,进而结合化学空间中的拓扑描述符的研究思路和定量构效关系（Quantitative structure-activity relationship,QSAR）中显着特征加权（Weighted Feature Significance,WFS）模型等研究方法,构建六味络痹颗粒治疗2型糖尿病周围神经病变的“靶效空间”,以预测六味络痹颗粒作用于DPN的靶点与疗效的关系,为中药复方作用于疾病的多靶点疗效评价体系提供新的思路。研究方法1随机选取180尾斑马鱼于烧杯中,每个烧杯30尾,水溶给予六味络痹颗粒1 1 1、333和1000 μg/mL,阳性对照组水溶给予辛伐他汀0.04 μg/mL浓度,同时设置正常组和模型组,每个烧杯（实验组）容量为25 mL。正常组水溶给予斑马鱼开口饲料,其余组别均水溶给予高糖高脂饲料。六味络痹颗粒与高脂饲料共同处理30 h,在荧光显微镜下拍照,分别采集斑马鱼泄殖孔上方三个体节所在区域的外周运动神经的荧光强度和周围中性粒细胞数量评价六味络痹颗粒对高糖高脂斑马鱼外周运动神经的保护作用和炎症消退作用。2选取检疫合格的SPF级雄性12周龄db/db小鼠（自发性2型糖尿病小鼠）120只,体重40-50 g,按血糖值兼体重随机分为模型组,木丹颗粒组,依帕司他组,六味络痹颗粒低、中、高剂量组共6个剂量组,每组20只动物,另取20只同周龄的db/m小鼠为正常组。各剂量组按20 mL/kg灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药12周,正常组和模型组灌胃给予等体积纯水。给药期间每周监测小鼠体重。于给药第4周、6周和12周监测小鼠空腹血糖。于给药第4、6、8、10、12周,对小鼠进行机械痛阈值测定;于给药第6、12周分别测定小鼠右侧坐骨神经运动神经传导速度（Motor nerve conduction velocity,MCV）和感觉神经传导速度（Sensory nerve conduction velocity,SCV）。3在给药第12周对db/db小鼠测定完神经传导速度后采集小鼠血清,首先运用非靶向代谢组学方法来检测小鼠血清中存在的代谢物,然后对检测出来的代谢物进行通路分析,以确定靶标代谢物;然后运用靶向代谢组学方法检测小鼠血清中靶标代谢物的浓度,从而确定六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的药理作用靶点。4以靶标代谢物为节点,基于代谢物在血清中的浓度运用Pearson相关系数定义节点间的边,运用Cytoscape 3.7.2软件构建靶点网络和运用MCODE方法对靶点网络进行模块划分;然后运用Network Analyzer软件计算每个靶点的拓扑描述符,进而运用Kolmogorov-Smirnov检验来确定不同网络的特异性靶点;然后用多元线性回归方法计算模块对疗效的权重因子;最后建立WFS模型,以预测不同治疗组中模块/靶点对疗效的影响,且WFS模型的性能进行验证。研究结果1对斑马鱼外周运动神经的影响:（1）对斑马鱼外周运动神经的保护作用:模型组斑马鱼外周运动神经荧光强度为226708像素,正常组为275609像素,两组比较P<0.05,提示造模成功;阳性对照药辛伐他汀组的斑马鱼外周运动神经荧光强度为270724像素,与模型组比较P<0.001,其对斑马鱼外周运动神经的保护作用为90%,提示辛伐他汀对斑马鱼外周运动神经具有明显的保护作用。六味络痹颗粒在111 μg/mL、333μg/mL和1000 μg/mL浓度下对斑马鱼外周运动神经荧光强度分别为258442、273003和278570像素,与模型组比较均P<0.01,其对斑马鱼外周运动神经的保护作用分别为65%、95%和106%,提示六味络痹颗粒对高糖高脂斑马鱼外周运动神经具有明显的保护作用。（2）对外周运动神经的炎症消退作用:模型组斑马鱼外周运动神经周围中性粒细胞个数为13.10,与正常组（4.80个）比较P<0.001,提示模型构建成功;阳性对照药辛伐他汀组斑马鱼外周运动神经周围中性粒细胞数为4.80个,与模型组比较P<0.001,其对斑马鱼炎症消退作用为63%,提示辛伐他汀对斑马鱼具有明显的炎症消退作用。六味络痹颗粒在111 μg/mL、333 μg/mL和1000 μg/mL浓度下斑马鱼外周运动神经周围中性粒细胞数分别为7.10、6.80和5.60个,与模型组比较P均<0.001,其对斑马鱼炎症消退作用分别为46%、48%和57%,说明六味络痹颗粒对高糖高脂斑马鱼外周运动神经具有明显的炎症消退作用。2对db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变模型的影响:（1）对血糖的影响:与正常组比较,模型组给药前及给药后空腹血糖值均增加。与模型组比较,阳性药依帕司他组和木丹颗粒组无明显差异;六味络痹颗粒低剂量组的血糖随着给药周期而持续降低,且在给药第12周时差异明显;六味络痹颗粒中剂量组在给药第4、6、12周时空腹血糖值无明显差异,且无随给药周期而降低的趋势;六味络痹颗粒高剂量组在给药第4、6、12周时空腹血糖值随给药周期持续增加,且在给药第12周时明显差异（P<0.05）。（2）对体重的影响:同一时期,与正常组比较,模型组小鼠给药前及给药后体重均明显增加。与模型组比较,木丹颗粒组在给药第4周小鼠体重降低,六味络痹颗粒高剂量组在给药第3、4、5周小鼠体重均降低,但这些体重降低值均在正常生长波动范围内;其余各给样组小鼠体重无统计学差异。（3）对机械痛阈值的影响:与正常组比较,给药前及给药期间模型组小鼠后肢机械痛阈值均明显增加,提示造模成功。与模型组比较,六味络痹颗粒低剂量组在给药第6、8、12周痛阈值均降低（P<0.05）;六味络痹颗粒中、高剂量组在各给药周期痛阈值均降低（P<0.05）。与模型组比较,阳性药木丹颗粒组在给药第6、8、10、12周痛阈值均降低,依帕司他组各给药周期痛阈值均明显降低（P<0.05）。（4）对坐骨神经传导速度和感觉神经传导速度的影响:与正常组比较,各给药期模型组小鼠MCV和SCV均降低。在给药第6周:与模型组比较,木丹颗粒组小鼠MCV明显增加;六味络痹颗粒高剂量组小鼠SCV明显增加。在给药第12周:与模型组比较,六味络痹颗粒中、高剂量组小鼠MCV和SCV均增加;低剂量组MCV显着增加;阳性药木丹颗粒组和依帕司他组小鼠MCV和SCV均增加;提示六味络痹颗粒可以改善糖尿病周围神经病变小鼠的周围神经功能传导障碍。3对用药第12周时db/db小鼠的血清进行非靶向代谢组学检测:（1）六味络痹颗粒高剂量组与模型组比较:正离子模式下共29个代谢物,负离子模式下共44个代谢物,其中5个代谢物在两种模式下均存在:N-甲基-L-组氨酸,L-精氨酸,牛磺酸,（11E）-十八烯酸,（9Z）-十八烯酸和牛磺胆酸。（2）木丹颗粒组与模型组比较:正离子模式下共29个代谢物,负离子模式下共47个代谢物,其中6个代谢物在两种模式下均存在:L-苏氨酸、N（pi）-甲基-L-组氨酸、L-精氨酸、牛磺酸、（11E）-十八烯酸、（9Z）-十八烯酸和牛磺胆酸。（3）依帕司他组与模型组比较:正离子模式下共25个代谢物,负离子模式下共47个代谢物,其中5个代谢物在两种模式下均存在:N-甲基-L-组氨酸,L-精氨酸,牛磺酸（11E）-十八烯酸,（9Z）-十八烯酸,牛磺胆酸。（4）分别对六味络痹颗粒高剂量组、木丹颗粒组和依帕司他组中检测出的代谢物建立代谢网络进行通路分析,发现六味络痹颗粒改善小鼠2型糖尿病周围神经病变主要与22条通路相关:氨基糖代谢,胆汁酸的生物合成,果糖和甘露糖代谢,维生素B1代谢等;木丹颗粒改善小鼠2型糖尿病周围神经病变主要与23条通路相关:甘氨酸,丝氨酸,丙氨酸和苏氨酸的代谢,嘌呤代谢,三羧酸循环等;依帕司他改善小鼠2型糖尿病周围神经病变主要与26条通路相关:白三烯代谢,磷酸戊糖途径,维生素B3（烟酸酯和烟酰胺）代谢等。4对用药第12周时db/db小鼠血清中靶向代谢物的定量检测:通过对同型半胱氨酸、N-乙酰-L-苯丙氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、牛磺酸、甘氨酸、牛磺胆酸、胆酸、烟酰胺、谷氨酰胺等15个靶标代谢物定量检测和分析,六味络痹颗粒在不同剂量组的作用靶点不同;与正常组比较,模型组中烟酰胺、N-乙酰-L-苯丙氨酸、亮氨酸和糖类化合物具有明显差异。与模型组比较,发现木丹颗粒组中谷氨酰胺、天门冬氨酸、精氨酸和甘氨酸差异明显;依帕司他组中无具统计学意义的代谢物。与模型组比较,六味络痹颗粒低剂量组中差异明显的代谢物为糖类、同型半胱氨酸;六味络痹颗粒中剂量组为组氨酸、牛磺酸;六味络痹颗粒高剂量组中为牛磺酸、同型半胱氨酸。5运用Pearson相关系数和Cytoscape 3.7.2软件分别对正常组、模型组、木丹颗粒组、依帕司他组、六味络痹颗粒低剂量组、六味络痹颗粒中剂量组和六味络痹颗粒高剂量组建立了 7个节点数均为15,边数分别为78、69、75、82、62、68和68的靶点网络。6运用Cytoscape 3.7.2软件中MCODE cluster插件分别对7个网络进行模块划分,发现正常组、模型组、木丹颗粒组、依帕司他组、六味络痹颗粒低剂量组、六味络痹颗粒中剂量组和六味络痹颗粒高剂量组这7靶点网络中分别得到了 2、3、3、1、2、2、2个模块,且发现N-乙酰-L-苯丙氨酸和糖类这两个节点总是在同一个模块中,处于稳定状态。77个靶点网络划分模块后计算网络的基本参数显示:网络直径（Network diameter）和网络半径（Networkradius）这两个参数值在所有网络中均相同。连通分量（Connected components）、网络中心性（Network centralization）、网络异质性（Network heterogeneity）和孤立节点数（Isolated nodes）这四个参数值是随着六味络痹颗粒剂量的升高而逐渐增加。最短路径（Shortestpaths）、节点平均邻居数（Avg.number of neighbors）和网络密度（Network density）这三个参数值随着六味络痹颗粒剂量的升高而逐渐减少。8运用Kolmogorov-Smirnov test来筛选每个组靶点网络中划分模块后,与模型组比较的特异性靶点,木丹颗粒组靶点网络中胆酸、精氨酸和谷氨酸是其特异性靶点,依帕司他组靶点网络中共有2个特异性靶点,即胆酸和苏氨酸。六味络痹颗粒低剂量组的特异性靶点有3个:胆酸、苏氨酸、精氨酸;六味络痹颗粒中剂量组有1个特异性靶点:天门冬氨酸;而六味络痹颗粒高剂量组中有3个特异性靶点:天门冬氨酸、组氨酸和牛磺胆酸。其中天门冬氨酸在六味络痹颗粒中、高剂量组这两个靶点网络中均是特异性靶点。9运用多元线性回归方程计算与模型组比较后,每个组靶点网络中模块对疗效的权重因子:与模型组比较,木丹颗粒组靶点网络中,2号模块和1号模块分别对MCV和SCV的贡献度为最高的;依帕司他组靶点网络中,孤立靶点精氨酸对MCV和SCV的权重因子均为最高;六味络痹颗粒低剂量组的靶点网络中,对MCV影响最大的为孤立节点谷氨酸,而对SCV影响最大的为1号模块;在六味络痹颗粒中剂量组的靶点网络中,对MCV和SCV影响最大的均为网络中的孤立节点,且分别为胆酸和天门冬氨酸;在六味络痹颗粒高剂量组的靶点网络中,孤立节点牛磺酸对MCV和SCV影响均为最大。10运用显着特征加权模型预测每个靶点网络中模块/孤立节点对疗效的影响分数:与模型组比较,木丹颗粒组中与疗效WFS-MCV和WFS-SCV最相关的靶点组合可能是天门冬氨酸、胆酸、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、组氨酸这6个靶点;依帕司他组中无论是WFS-SCV,还是WFS-MCV,均是苏氨酸最高;六味络痹颗粒低剂量组中,苏氨酸的WFS-MCV和WFS-SCV均是最高的;六味络痹颗粒中剂量组中,胆酸对MCV和SCV的WFS分数最高;六味络痹颗粒高剂量组,WFS-MCV最高的是牛磺胆酸和天门冬氨酸,而WFS-SCV最高的是2号模块（由N-乙酰-L-苯丙氨酸、糖类、亮氨酸组成）。11通过运用小鼠给药第6周的数据对模型进行验证,来判定WFS模型构建的性能是否稳定:与模型组比较,木丹颗粒组中WFS-MCV和WFS-SCV分数最高的为三个孤立节点,分别为精氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸;依帕司他组中WFS-SCV和WFS-MCV分数最高的靶点也为三个,且均为孤立靶点,且分别为谷氨酸、甘氨酸和组氨酸。六味络痹颗粒低剂量组中,1号模块（同型半胱氨酸、N-乙酰-L-苯丙氨酸、糖类、谷氨酰胺、牛磺酸、烟酰胺）的WFS-MCV最高,苏氨酸的WFS-SCV为最高;六味络痹颗粒中剂量组中,胆酸和谷氨酸这两个孤立靶点的WFS-MCV最高,牛磺胆酸的WFS-SCV最高;同理,在六味络痹颗粒高剂量组,WFS-MCV最高的是牛磺胆酸和天门冬氨酸,而WFS-SCV最高的是胆酸和天门冬氨酸。结论1六味络痹颗粒对高脂高糖斑马鱼的外周运动神经具有保护作用和炎症消退作用。2六味络痹颗粒,主要用于改善2型糖尿病周围神经病变的瘀热阻络证,具有清热凉血,补肾通络的功效,可改善DPN神经传导速度和麻木、疼痛等症状。3六味络痹颗粒可增加db/db小鼠糖尿病周围神经病变模型的运动神经传导速度和感觉神经传导速度,同时可降低小鼠的机械痛阈值和空腹血糖,提示六味络痹颗粒可改善2型糖尿病周围神经病变,且主要改善其神经传导功能障碍。4基于代谢组学检测技术,发现六味络痹颗粒改善2型糖尿病周围神经病变的药理作用靶点主要是糖类、同型半胱氨酸、组氨酸和牛磺酸,且糖尿病周围神经病变该疾病的生物标志物主要涉及烟酰胺、N-乙酰-L-苯丙氨酸、亮氨酸、精氨酸和糖类代谢物。5通过构建WFS模型,有效的将靶点在网络中的拓扑结构信息与其疗效信息相关联,从而来预测模块（多靶点组合）/节点随网络结构的变化对疗效的影响,直观的将中药复方治疗疾病的“靶点”和“效应”联系起来,构建了“靶效空间”。6基于“靶效空间”的构建方法,六味络痹颗粒在治疗小鼠2型糖尿病周围神经病变过程中,N-乙酰-L-苯丙氨酸和糖类这两个靶点联系紧密,且所在模块对SCV疗效的影响分数呈现随着中药复方剂量的增加而增加的趋势,提示N-乙酰-L-苯丙氨酸和糖类这一靶点组合可能是该中药复方治疗2型糖尿病周围神经病变的关键靶点组合。
李晓文[2]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中指出研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
冯莉娟[3]（2021）在《MicroRNA-21促进糖尿病角膜上皮修复及神经再生的研究》文中提出目的:糖尿病角膜病变（diabetic keratopathy,DK）是糖尿病患者眼部主要的并发症之一,由于糖尿病发病率逐年升高,DK受到越来越多的关注;研究微小RNA 21（micro RNA-21,miR-21）在糖尿病角膜病变中的作用并初步探索其对角膜上皮细胞和三叉神经节细胞的影响,有望为DK的治疗提供新的思路。方法:利用RT-PCR法比较正常小鼠与糖尿病小鼠角膜上皮和三叉神经节组织中miR-21的表达;建立WT与miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮损伤模型,荧光素钠染色观察角膜损伤上皮修复情况,特异性神经染色评价角膜上皮下神经丛再生情况,应用TUNEL荧光染色法检测角膜上皮及三叉神经节组织的凋亡情况;在小鼠角膜上皮干/祖细胞系（TKE2）中过表达miR-21,同时给予高糖处理,采用划痕试验检测细胞迁移能力,Annexin V/7-AAD双荧光染色检测细胞凋亡;在原代三叉神经节细胞中过表达miR-21,应用免疫荧光法观察三叉神经节细胞轴突的生长及分支,TUNEL染色法检测三叉神经节细胞凋亡。利用转录组测序筛选WT与miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮及三叉神经节中差异表达的基因,并利用GO对差异表达的基因进行生物功能富集分析;在糖尿病小鼠的结膜下注射miR-21agomir并构建角膜上皮损伤模型,观察角膜上皮损伤恢复及角膜周围神经再生情况,TUNEL荧光染色法检测角膜上皮及三叉神经节组织的凋亡情况。结果:糖尿病小鼠角膜上皮及三叉神经节中的miR-21表达增高,角膜上皮损伤后再生上皮中miR-21表达明显上调,但糖尿病小鼠角膜上皮中miR-21升高幅度低于正常小鼠;miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮损伤的修复明显慢于WT糖尿病小鼠,角膜神经再生密度小于WT糖尿病小鼠;进一步研究表明,miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮细胞及三叉神经节凋亡较WT糖尿病小鼠增加。高糖条件下过表达miR-21后,TKE2细胞的迁移能力较对照组明显增加,凋亡减少;原代三叉神经节细胞在体外过表达miR-21后其轴突长度较对照组明显增加,凋亡细胞数较对照组减少,通过转录组测序筛选出497个和554个分别在WT和miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮组织和三叉神经节组织中差异表达的基因,GO分析显示差异表达基因显着富集的信号通路主要涉及细胞迁移、细胞粘附、细胞增殖与分化、细胞凋亡、以及损伤修复及神经生长等;在糖尿病小鼠结膜下注射miR-21 agomir可以明显加快角膜上皮损伤愈合的过程和促进角膜神经再生。结论:1.角膜上皮损伤导致角膜上皮组织中miR-21的表达增高,但糖尿病小鼠角膜上皮组织中miR-21的升高幅度低于正常小鼠;2.Mi R-21促进角膜上皮细胞迁移、降低高糖诱导的角膜上皮细胞和三叉神经节细胞的凋亡程度以及促进神经生长;3.过表达miR-21可促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复和角膜周围神经的再生。
宁瑞卓[4]（2021）在《加味补阳还五汤治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变疗效观察及对IGF-1的影响》文中研究说明目的:通过观察及研究加味补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）的临床疗效,比较治疗前后血清中胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）的表达变化,从而探讨该方在治疗糖尿病患者周围神经功能障碍过程中对IGF-1的影响和治疗机理。方法:选取我院2019年04月～2020年01月收治的60例气虚血瘀型糖尿病周围神经病变患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,对照组给予甲钴胺口服,治疗组给予甲钴胺和加味补阳还五汤口服,共12周。治疗前后对比患者的中医证候积分、中医单项症状积分、密西根州糖尿病周围神经病变（Michigan diabetic neuropathy score,MDNS）评分、血清IGF-1水平,治疗后血清IGF-1水平与MDNS评分的相关性。所得数据计量资料用t检验,计数资料用x2检验,相关性分析采用Pearson相关分析,等级资料用Ridit分析等统计学方法。结果:1、治疗后两组患者中医证候积分均明显降低（P<0.05）;治疗组中医证候积分改善显着优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。2、治疗后两组患者的肢体麻木、肢体疼痛、全身乏力、气短懒言等中医单项症状积分均降低（P<0.05）;治疗组各症状的改善优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。3、治疗后两组中医证候疗效比较,治疗组优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。4、治疗后两组患者MDNS评分均降低（P<0.05）;治疗组MDNS评分改善显着优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。5、治疗后两组患者血清IGF-1水平均升高（P<0.05）;治疗组患者血清IGF-1水平升高显着优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。6、治疗后分析患者血清IGF-1水平与MDNS评分相关性显示,IGF-1水平与MDNS评分呈显着负相关。结论:1、加味补阳还五汤可改善气虚血瘀型DPN患者的中医证候积分和增加中医证候疗效。2、加味补阳还五汤可改善气虚血瘀型DPN患者肢体麻木,疼痛,全身无力,气短懒言,自汗盗汗等单项症状。3、加味补阳还五汤可降低气虚血瘀型DPN患者MDNS评分。4、加味补阳还五汤可提高气虚血瘀型DPN患者IGF-1水平,且IGF-1水平与MDNS评分呈负相关性,提示加味补阳还五汤可能是通过影响IGF-1的表达从而对气虚血瘀型DPN患者具有治疗作用。
贾晓颖[5]（2021）在《糖络宁对高糖培养下大鼠背根神经元中miR-211及IRE1α-CHOP通路的影响》文中研究表明研究目的本研究从体外角度,针对miR-211及IRE1α-CHOP通路来探讨糖络宁防治糖尿病周围神经病变（DPN）的作用机理。通过基因沉默和过表达,验证miR-211及IRE1α-CHOP通路在DPN发病中的作用。研究方法60只SD大鼠,随机分为2组,正常组35只,糖络宁组25只,分别予以2.5 g/kg-d的糖络宁生药和等量蒸馏水灌胃。连续灌胃10天,制备正常血清和糖络宁血清。新生大鼠提取背根神经元细胞（DRGn）。采用Lipo2000法进行转染,将细胞分为正常组、模型组、抑制剂对照组、抑制剂组、中药组、激动剂中药对照组和激动剂中药组。使用q-PCR 检测 DRGn 细胞中 miR-211、IRE1α、CHOP 和 XBP1 的基因表达水平;Western Blot法检测DRGn细胞中IRE1α、p-IRE1α、XBP1、CHOP蛋白表达;荧光探针法测定DRGn细胞ROS水平,黄嘌呤氧化酶技术检测SOD活性,硫代巴比妥法测定MDA含量。研究结果1.qRT-PCR检测结果:与正常组相比,模型组的miR-211、IRE1α、XBP1、CHOP mRNA值均显着升高（P<0.01）;与模型组相比,中药组、抑制剂组的miR-211、IRE1α、XBP1、CHOP mRNA值均明显降低（P<0.01）,抑制剂对照组无差异（P>0.05）;与中药组相比,激动剂中药组的miR-211、IRE1α、XBP1、CHOP mRNA值升高（P<0.01）,激动剂中药对照组无差异（P>0.05）。2.Western Blot检测结果:与正常组相比,模型组、抑制剂对照组IRE1α、p-IRE1α、XBP1、CHOP蛋白表达明显增高（P<0.01）;与模型组相比,中药组、抑制剂组IRE1α、p-IRE1α、XBP1、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.01）,抑制剂对照组无差异（P>0.05）;与中药组相比,激动剂中药组IRE1α、p-IRE1α、XBP1、CHOP蛋白表达明显升高（P<0.01）,激动剂中药对照组无差异（P>0.05）。3.氧化指标检测结果:与正常组相比,模型组的ROS、MDA显着提高（P<0.01）,SOD活力明显减低（P<0.01）;与模型组相比,中药组、抑制剂组ROS、MDA明显减低（P<0.01）,SOD活力增加（P<0.01）,而抑制剂对照组无差异（P>0.05）;与中药组相比,激动剂中药组ROS、MDA升高（P<0.01）,SOD活力减低（P<0.01）,激动剂中药对照组无差异（P>0.05）。结论1.DRGn细胞通过转染miR-211抑制剂和激动剂可构建有效的miR-211低表达和过表达的模型。miR-211抑制剂可使IRE1α-CHOP通路活性减低,进而缓解高糖对DRGn细胞的氧化损伤。miR-211激动剂能增加IRE1α-CHOP通路的活性,进而使糖络宁对高糖诱导的DRGn细胞的抗氧化作用降低。2.高糖可使DRGn细胞中miR-211表达增加,进而激活IRE1α-CHOP通路,引发内质网应激和氧化应激,使细胞受损;糖络宁含药血清可使miR-211水平减低,降低IRE1α-CHOP通路活性,进而改善内质网应激和氧化应激,缓解细胞损伤。本研究表明,糖络宁可改善高糖诱导的DRGn细胞的氧化损伤,这一保护作用可能依赖于糖络宁能下调miR-211的表达,进而抑制高糖下IRE1α-CHOP通路的活性,缓解氧化损伤,改善DPN。
李欣[6]（2021）在《姜黄素对高糖诱导的RSC96细胞炎症反应的影响及其机制研究》文中提出目的:探讨中药姜黄有效成分姜黄素对高糖诱导的RSC96细胞炎症反应的影响及其机制。方法:体外常规培养RSC96细胞,按随机原则分为正常组（Normal组）、模型组（400 mM High glucose组）和药物组（400 mM High glucose+25μM Curcumin组）。1.CCK-8法检测细胞存活率。2.Western Blot法检测凋亡相关因子cleaved caspase 3、caspase 3和炎症相关因子IL-1β、NF-κB、p-NF-κB的蛋白表达。3.ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β含量。4.免疫荧光法观察NF-κB核易位情况。结果:1.CCK-8结果显示:0～400 mM葡萄糖处理RSC96细胞,细胞存活率与葡萄糖浓度呈负相关,且在400 mM时明显下降;400 mM葡萄糖处理细胞0～10 h,随时间推移,细胞活力逐渐下降,在6 h时,约为50%;0～100μM姜黄素预处理细胞30 min后,加入400 mM葡萄糖共同作用细胞6 h,与其他浓度组相比,25μM姜黄素组细胞存活率最高,有统计学差异。2.Western Blot结果显示:400 mM葡萄糖处理细胞0～10 h,在4～10 h时,cleaved caspase 3、IL-1β、NF-κB蛋白表达呈现不同程度增多,且均在6 h时达到峰值,差异具有统计学意义（P<0.01、0.05、0.05）;0～100μM姜黄素预处理细胞30 min后,400 mM葡萄糖共同作用细胞6 h,与其他浓度组相比,25μM姜黄素组caspase 3蛋白表达最低（P<0.01）;以25μM姜黄素预处理细胞,与模型组相比,药物组IL-1β、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达明显下调（P<0.05）。3.ELISA结果显示:与正常组相比,模型组细胞培养上清液中IL-1β含量显着增多;与模型组相比,药物组IL-1β水平降低（P<0.01）。4.免疫荧光结果显示:与正常组相比,模型组胞核内NF-κB表达增强（P<0.05）;与模型组相比,药物组NF-κB核内表达减弱（P<0.01）。结论:姜黄素可能通过抑制NF-κB通路改善高糖诱导的RSC96细胞炎症反应。
吴一行[7]（2020）在《糖尿病勃起功能障碍的实验与临床研究》文中认为[背景与目的]传统治疗对糖尿病性勃起功能障碍（DED）疗效极差甚至无效,提示DED具有目前未知的独特发病机制。研究发现,糖尿病模型睾丸中神经生长因子（NGF）水平显着降低,Leydig细胞（LC）的本质是神经内分泌细胞,而成人睾丸中存在已知所有的NGF受体。本研究将首次应用生物信息学研究DED,发现糖尿病阴茎组织与正常的差异表达基因（DEG）,并鉴定出枢纽基因,以进一步理解DED的发病机制。为了阐明NGF在睾酮生物合成中的作用,我们拟制作糖尿病LC损伤模型,后施以NGF干预,以明确NGF对此可能的作用环节。随后,临床观察NGF对DED的疗效,为有效治疗DED奠定理论基础、提供实践经验。[方法]1.由基因表达综合数据库（GEO）下载数据。确定DED组和对照组之间的DEG。使用注释可视化和集成发现（DAVID）数据库分析基因本体（GO）和《京都基因与基因组百科全书》（KEGG）中的功能富集。使用STRING和Cytoscape软件识别枢纽基因,并收集临床数据以评估生物信息学的发现。2.以甲基乙二醛（MGO）建立糖尿病损伤小鼠LC模型,以细胞增殖-毒性法检测细胞活力,以罗丹明123检测LC线粒体膜电位（MMP）,用Westernblot检测类固醇合成快速调节蛋白（StAR）和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（CYP11A1）,并观察NGF在其中的作用。3.随机双臂开放标签的临床研究,以证实男性2型糖尿病（T2DM）所致ED合并周围神经病变（DSPN）患者使用NGF后,治疗组和对照组血清睾酮水平和国际勃起功能指数（IIEF-5）评分的变化。[结果]1.糖尿病与正常的阴茎组织有172个DEG,其中13个为枢纽基因,胰岛素相关的胞外基质蛋白质合成存在功能障碍。DED患者的胰岛素抵抗稳态模型评估（HOMA-IR）与IIEF-5评分之间存在明显的负相关（r=-0.51）。2.以最佳浓度为200 μM的MGO建立糖尿病损伤小鼠LC模型。3.暴露于MGO后LC的细胞活力显着降低,且存在剂量-反应-依赖性关系,经NGF预处理后,LC细胞活力明显高于对照组,NGF最佳浓度为25 ng/ml。4.暴露于MGO后LC的MMP显着降低,而经NGF预处理后,再予MGO处理,LC的MMP明显高于对照组。5.MGO暴露LC 24小时对StAR的表达影响不明显。NGF明显增加StAR的表达。MGO暴露导致CYP11A1表达显着降低,NGF预处理可使CYP11A1水平显着增加。单独的NGF可以显着上调CYP11A1的表达。6.临床观察发现男性T2DM合并DSPN患者使用NGF后,血清睾酮水平和IIEF-5评分显着提高。[结论]胰岛素抵抗是DED的主要病因之一。NGF对糖尿病损伤LC的作用环节在保护细胞活力,MMP,和增加StAR,CYP11A1的表达。NGF在男性合并有DSPN的T2DM所致DED的治疗中具有临床潜力。
刘琴[8]（2020）在《基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制》文中提出研究目的本研究从体外实验探讨糖络宁对高糖培养的大鼠背根神经元细胞miR-200a及氧化应激的影响,以部分阐明中药糖络宁用于临床治疗糖尿病周围神经病变的可能作用机制。研究方法SPF级SD大鼠灌胃10天制备糖络宁含药血清及大鼠正常血清。提取并鉴定大鼠背根神经元神经节（DRGn）细胞。采用不同葡萄糖浓度（50 mmol/L、75 mmol/L、100 mmol/L）、不同浓度糖络宁含药血清（2.5%、5%、10%、20%、30%）培养DRGn细胞,通过CCK-8法检测细胞活性,确定最佳高糖浓度及最佳糖络宁含药血清浓度;运用荧光探针技术检测DRGn细胞中的ROS水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,硫代巴比妥法检测MDA含量;采用实时荧光定量PCR技术检测DRGn细胞中miR-200a、PI3K的基因表达水平;通过Western Blot技术检测DRGn细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的蛋白表达水平。研究结果1.不同浓度葡萄糖及糖络宁含药血清对DRGn细胞活性的影响随着葡萄糖浓度的增加,DRGn细胞活性显着下降,有统计学差异（P<0.01）;50 mmol/L葡萄糖浓度组与75 mmol/L葡萄糖浓度组、75 mmol/L葡萄糖浓度组与100 mmol/L葡萄糖浓度组相比细胞活性均显着下降,有统计学差异（P<0.01）。与24 h相比,各葡萄糖浓度组DRGn在48 h细胞活性均明显下降,有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。随着糖络宁含药血清浓度的增加,DRGn细胞活性呈现先升高后下降的趋势,在糖络宁含药血清浓度为10%时细胞活力最大。其中2.5%浓度组与5%浓度组相比细胞活力无统计学差异（P>0.05）,5%浓度组与10%浓度组相比、10%浓度组与20%浓度组相比、20%浓度组与30%浓度组相比细胞活力均有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。与24 h相比,同一浓度糖络宁含药血清干预下的DRGn在48h的细胞活性均有所下降,10%糖络宁含药血清干预下细胞活性下降有统计学差异（P<0.05）,其余糖络宁含药血清干预下细胞活性下降无统计学差异（P>0.05）。2.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞氧化应激水平的影响与正常组相比,高糖组DRGn细胞中ROS、MDA含量显着增高（P<0.01）,SOD活力显着下降（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组DRGn细胞中ROS、MDA含量显着下降（P<0.01）,SOD活力显着增高（P<0.01）。3.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中miR-200a mRNA、PI3K mRNA表达水平的影响与正常组相比,高糖组DRGn细胞中miR-200amRNA值显着增高（P<0.01）、PI3K mRNA值显着降低（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组DRGn细胞中miR-200a mRNA值显着降低（P<0.01）、PI3K mRNA值显着增高（P<0.01）。4.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平的影响与正常组相比,高糖组 PI3K、p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT 蛋白表达水平均显着降低（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组PI3K、p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT蛋白表达水平均显着增高（P<0.01）。结论1.糖络宁可以改善高糖环境下DRGn细胞的氧化应激水平;2.糖络宁改善高糖培养下的DRGn细胞中氧化应激水平可能是通过调控miR-200a及PI3K/AKT信号通路实现的。
李建[9]（2020）在《穿山龙提取物薯蓣皂苷对PDPN小鼠坐骨神经JAK/STAT信号通路的影响》文中进行了进一步梳理目的:运用网络药理学研究方法预测穿山龙的活性成分、作用靶点和信号通路,探讨穿山龙治疗PDPN的作用机制,为下一步动物实验奠定理论基础;根据预测结果,选择穿山龙中的主要活性成分薯蓣皂苷进行动物实验,深入研究薯蓣皂苷对PDPN小鼠坐骨神经p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响,以进一步探讨穿山龙提取物薯蓣皂苷治疗PDPN的作用机制,从而为中医药防治PDPN提供新的手段。材料与方法:1.网络药理学研究检索中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）和台湾中医药资料（TCM Database@taiwan）,并参考国内外文献,收集穿山龙的化学成分信息。按照Lipinski类药性五规则并结合文献报道,筛选出穿山龙的活性成分。利用Pharm Mapper数据库和Genecards数据库预测并筛选出穿山龙治疗PDPN的潜在靶点;通过DAVID 6.8数据库对获得的靶点蛋白进行KEGG通路注释;采用String 10.5数据库和Cytoscape 3.5.1软件绘制“活性成分-靶点-信号通路”网络图和“蛋白质-蛋白质相互作用”网络图。2.动物实验选择体重为20-25g的SPF级雄性C57BL/6小鼠83只,适应性喂养一周后,随机选取12只为正常对照组,其余小鼠通过腹腔内连续两日注射1%链脲佐菌素溶液（Streptozotocin,STZ）70mg/kg（用PH4.2,0.1mol/L的枸椽酸缓冲液配制）诱导PDPN模型。成模后按随机数字表法,将小鼠分成4组,每组12只,分别为模型组、薯蓣皂苷高剂量组、薯蓣皂苷低剂量组和α-硫辛酸组。观察给药前0周和给药后2周、4周、6周、8周小鼠行为特征、血糖值、体重,检测给药前0周和给药后4周、8周机械痛阈值和热痛阈值,8周时采用Western Blot技术检测小鼠坐骨神经p-JAK2和p-STAT3蛋白表达。结果:1.穿山龙治疗PDPN网络药理学研究穿山龙27个活性成分可通过调控SRC、PIK3R1、STAT1、MAPK1、JAK2、IGF1、IL2等靶点,干预PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、VEGF信号通路、TLRS信号通路、JAK/STAT信号通路、PPAR信号通路等相关信号通路,发挥治疗PDPN的作用。2.动物实验研究2.1.模型组与各治疗组小鼠均出现精神萎靡不振,动作迟钝,反应能力差,倦怠嗜卧,蜷卧拱背,摄食及尿量增加,毛色枯萎无光泽,其中以模型组症状最重,并随着时间推移而逐渐加重,各治疗组在给药2周、4周、6周、8周后,上述症状较模型组有明显改善。2.2.模型组和治疗组较正常对照组小鼠血糖水平有明显的升高（P<0.01）;2周、4周、6周、8周时各治疗组较模型组小鼠血糖水平有明显改善（P<0.01）;8周时薯蓣皂苷高剂量组小鼠血糖水平降低最明显（P<0.01）。2.3.模型组和治疗组较正常对照组小鼠体重水平有明显的减轻（P<0.01）,随着病程的延长,模型组小鼠体重不断下降,4周、6周、8周时各治疗组与同期模型组相比较小鼠的体重明显增加（P<0.01）。2.4.模型组、各治疗组与正常对照组相比小鼠的机械痛阈值明显降低（P<0.01）;4周、8周时各治疗组与模型组相比小鼠的机械痛阈值明显升高（P<0.01）,8周时薯蓣皂苷高剂量组与薯蓣皂苷低剂量组相比小鼠的机械痛阈值明显升高（P<0.05）。2.5.模型组、各治疗组与正常组小鼠相比热痛阈值明显下降（P<0.01）;4周、8周时各治疗组与模型组相比小鼠的热痛阈值明显升高（P<0.01）,薯蓣皂苷高剂量组与低剂量组相比小鼠的热痛阈明显升高（P<0.05）。2.6.模型组、各治疗组与正常组小鼠相比坐骨神经p-JAK2蛋白表达量显着增加（P<0.05）,其中模型组表达量在其余四组中最大（P<0.01）;薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组与模型组小鼠相比坐骨神经p-JAK2蛋白表达量明显下降,其中薯蓣皂苷高剂量组下降最明显（P<0.01）。与正常组相比,模型组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量显着增加（P<0.01）,各治疗组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量略有升高,但结果无统计学意义;与模型组相比,薯蓣皂苷低剂量组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量下降,但结果无统计学意义,薯蓣皂苷高剂量组及α-硫辛酸组小鼠坐骨神经p-STAT3蛋白表达量明显下降（P<0.01）。结论:1.穿山龙27个活性成分可通过参与炎症、免疫、氧化应激等过程来发挥治疗PDPN的作用。2.穿山龙提取物薯蓣皂苷可下调PDPN小鼠坐骨神经p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,提高热痛阈值和机械痛阈值,从而延缓神经损伤的进程。
谢骏[10]（2020）在《中药筋脉通对糖尿病大鼠的髓鞘保护作用及其对肠道菌群的影响》文中研究说明[目的]从整体和分子水平探讨中药筋脉通（Jinmaitong,JMT）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病（diabetes mellitus,DM）模型大鼠的髓鞘保护作用及对其肠道菌群的影响,探索中药筋脉通防治糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）的潜在机制。[方法]采用一次性腹腔注射STZ 55 mg/kg的方法制备DM模型大鼠,将造模成功后的DM大鼠按随机数字表法分为三组:糖尿病模型对照组（DM）,筋脉通组（JMT）,神经妥乐平（Neurotropin,NTP）组（NTP）,同时配以同周龄的正常对照组（CON）大鼠。分组后分别按JMT 13.9g/（kg·d）、NTP 1.6单位/（kg·d）灌胃给药,CON组与DM组大鼠予以等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续12 w。分别于干预前及干预后4w、8w、12w检测各组大鼠随机血糖和体重。灌胃12w后检测各组大鼠机械痛阈值,并收集大鼠粪便样品,腹主动脉采血后取大鼠坐骨神经组织与足底皮肤组织。光学显微镜及透射电子显微镜下观察坐骨神经的形态变化,免疫荧光法检测大鼠坐骨神经中接触蛋白相关蛋白（contactin-associated protein,Caspr）与淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）的表达,分析大鼠足底皮肤表皮神经纤维密度（intraepidermal nerve fiber density,IENFD）,酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测大鼠血清神经调节蛋白 1（Neuregulin 1,NRG1）浓度。同时,提取大鼠粪便基因组并进行16S rRNA基因测序,分析正常组与模型组大鼠肠道菌群组成结构的差异,以及筋脉通干预对模型组大鼠肠道菌群的影响;并将组间差异性肠道微生物的丰度与大鼠随机血糖、体重、机械痛阈值、IENFD、NRG1水平等生理、病理观察指标进行相关性分析。[结果]1.血糖、体重及机械痛阈检测:造模后不同时间点,各造模组大鼠随机血糖均较CON组升高（P<0.05）;同一时间点各造模组大鼠之间的血糖无统计学差异（P>0.05）。干预前各组大鼠体重均无统计学差异（P>0.05）;干预后各时间点,各造模组大鼠体重较CON组均明显降低（P<0.001）。除灌胃第8 w NTP组较DM组体重增加外（P<0.05）,其余时间点各造模组大鼠之间的体重无显着差异（P>0.05）。与CON组相比,除JMT组左侧机械痛阈值外,各造模组大鼠左、右两侧机械痛阈值及平均机械痛阈值较CON组均降低（P<0.01）;与DM组相比,JMT组及NTP组左、右两侧机械痛阈及平均机械痛阈值均显着提高（P<0.001）;JMT组与NTP组相比未见统计学差异（P>0.05）。2.坐骨神经病理结构变化:HE染色显示,大鼠坐骨神经组织轴索与髓鞘呈深红色,雪旺细胞细胞核位于髓鞘边缘呈蓝紫色。CON组大鼠坐骨神经组织致密,轮廓规则,髓鞘完整,分布均匀,DM组大鼠坐骨神经组织松散,轮廓不规则,部分神经纤维髓鞘脱失,轴索萎缩,分布稀疏;透射电镜下可见CON组大鼠坐骨神经轴索饱满、均匀,形态规则,髓鞘致密、均一,结构完整,局部可见髓鞘板层轻微断裂;DM组大鼠坐骨神经轴索形态不规则,髓鞘结构紊乱,板层分离形成大量空泡,部分可见髓鞘向轴索及间质突出,形成“瘤状”结构。形态测量学统计分析显示,DM组大鼠每5000 μm2面积内的有髓神经纤维数量明显减少（P<0.001）,结构形态异常的神经纤维比例增高（P<0.05）;JMT组与NTP组大鼠坐骨神经病变与DM组相似,但程度均较DM组减轻,每5000 μm2面积内的有髓神经纤维数量增加（P<0.05）,结构形态异常的神经纤维比例明显减少（P<0.001）;各组大鼠的gratio值（轴索直径与髓鞘外径比值）无统计学差异（P>0.05）。3.免疫荧光法检测大鼠坐骨神经接触蛋白相关蛋白Caspr与淀粉样前体蛋白APP的表达:与CON组相比,DM组大鼠坐骨神经每mm2面积内对称性的郎飞氏结结侧区数量与比例均降低（P<0.01）、非对称性的郎飞氏结半结比例增高（P<0.01）,DM组与NTP组大鼠坐骨神经中APP与βⅢ-tubulin蛋白共定位表达的区域比例升高（P<0.05）;与DM组相比,JMT组大鼠坐骨神经每mm2面积内对称性的郎飞氏结结侧区数量与比例均升高（P<0.05）、非对称性的郎飞氏结半结比例降低（P<0.01）,JMT组大鼠坐骨神中APP与βⅢ-tubulin蛋白共定位表达的区域比例降低（P<0.05）;与NTP组相比,JMT组大鼠坐骨神经每mm2面积内对称性的郎飞氏结结侧区数量增多（P<0.05）,其余指标二者无统计学差异（P>0.05）。各组间非对称性的郎飞氏结半结数量均未见统计学差异（P>0.05）。4.免疫荧光法检测分析大鼠足底皮肤表皮神经纤维密度IENFD:与CON组相比,DM组与NTP组IENFD降低（P<0.05）,JMT组IENFD与CON组相比无统计学差异（P>0.05）;与DM组相比,JMT组ⅢNFD升高（P<0.05）,NTP组与DM组相比无统计学差异（P>0.05）;JMT组与NTP组之间IENFD无统计学差异（P>0.05）。5.ELISA法检测大鼠血清NRG1的表达:与CON组相比,DM组、JMT组及NTP组大鼠血清NRG1浓度均降低（P<0.001）;与DM组相比,JMT组大鼠血清NRG1浓度升高（P<0.01）,NTP组与DM组相比差异无统计学意义（P>0.05）;JMT组与NTP组之间差异无统计学意义（P>0.05）。6.16S rRNA基因测序分析大鼠的肠道菌群结构变化:基于以上实验结果可判定DPN模型成功,就此更名DM组为DPN组。相比CON组,DPN组和JMT组大鼠肠道菌群的Alpha多样性指数明显降低（P<0.001）,DPN组与JMT组之间的Alpha多样性指数无统计学差异（P>0.05）。Beta多样性的 Weighted-UniFrac 与 Unweighted-UniFrac 分析结果均提示,CON、DPN、JMT 三组大鼠肠道菌群的Beta多样性具有显着性差异（P<0.01）。相比CON组大鼠,DPN组大鼠的肠道菌群中显着富集了以下10种差异性肠道微生物:pBacteroidetes,cBacteroidia,oBacteroidales,fPorphyromonadaceae,fPrevotellaceae,fOxalobacteraceae,gKlebsiella,gCoprococcus,gPrevotella,gOxalobacter。相比DPN组,JMT组大鼠的肠道菌群中显着富集了 17种差异性肠道微生物,且其中有 9 种与 CON 组一致:pActinobacteria,pProteobacteria,cBetaproteobacteria,cActinobacteria,cEpsilonproteobacteria,oBurkholderiales,oCampylobacterales,fHelicobacteraceae,gHelicobacter,说明筋脉通对上述9种肠道微生物的丰度具有回调作用。7.差异性肠道微生物丰度与DPN观察指标的Spearman相关性分析:在DPN组与CON组对比时富集到的10种差异性肠道微生物中,所有肠道微生物丰度均与大鼠第12 w随机血糖水平呈正相关（|r|>0.45,P<0.05）,并且与大鼠第12w体重呈负相关（|r|>0.45,P<0.05）;除fPrevotellaceae与大鼠血清NRG1水平无相关性外（|r|<0.40,P>0.05）,其余9种的微生物丰度还同时与大鼠血清NRG1水平呈负相关（|r|>0.45,P<0.05）。在DPN组显着富集的10种差异性肠道微生物中,fPorphyromonadaceae和gPrevotella的丰度同时与大鼠的机械痛阈值和IENFD呈负相关（|r|>0.40,P<0.05）。筋脉通可显着回调的9种肠道微生物的丰度均与大鼠血清NRG1水平呈正相关（|r|>0.40,P<0.05）。除cBetaproteobacteria和oBurkholderiales外,其余7种肠道微生物的丰度均与大鼠机械痛阈值（|r|>0.5,P<0.05）和IENFD（|r|>0.45,P<0.05）呈正相关。其中,pActinobacteria,pProteobacteria 和 cActinobacteria的丰度同时与大鼠第 12 w体重呈正相关（|r|>0.5,P<0.01）,与大鼠第12w随机血糖水平呈负相关（|r|>0.55,P<0.01）。[结论]1.DM大鼠12 w后出现痛觉过敏,坐骨神经病理形态学改变,及足底皮肤IENFD降低,表明DPN模型建立成功;DM大鼠血清NRG1分泌减少,坐骨神经Caspr表达抑制,APP表达增强,符合典型的糖尿病周围神经病变的病理特征。2.筋脉通可通过升高DM大鼠血清NRG1水平,促进坐骨神经Caspr表达,抑制APP表达,增加足底皮肤IENFD,改善其痛觉过敏及坐骨神经病理形态异常,发挥其髓鞘保护作用。3.筋脉通在维持坐骨神经正常结构形态与对称性的郎飞氏结结侧区数量上优于阳性对照药物NTP。4.DPN组大鼠的肠道菌群结构较CON组发生了明显变化,肠道菌群的物种丰富度、多样性与均匀性显着降低,可能通过富集fPorphyromonadaceae和gPrevotella影响DPN的各观察指标。5.筋脉通改变了 DPN大鼠肠道微生物群落的整体组成,回调了 9种在CON组显着富集的差异性肠道微生物,并可能通过富集pActinobacteria、pProteobacteria和c Actinobacteria参与发挥髓鞘保护作用。[创新点]通过整体动物实验,从分子水平研究了中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经组织中接触蛋白相关蛋白Caspr、淀粉样前体蛋白APP,以及血清神经调节蛋白1表达的影响,并尝试从肠道菌群的角度解释中药筋脉通防治DPN与发挥髓鞘保护作用的潜在机制,为中药筋脉通治疗DPN的临床应用提供了新的实验依据。
二、THE ROLE OF IGF-1 GENE EXPRESSION ABNORMALITY IN PATHOGENESIS OF DIABETIC PERIPHERAL NEUROPATHY（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、THE ROLE OF IGF-1 GENE EXPRESSION ABNORMALITY IN PATHOGENESIS OF DIABETIC PERIPHERAL NEUROPATHY（论文提纲范文）
（1）六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的靶效代谢组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 糖尿病周围神经病变的发病机制和治疗研究进展 |
| 1 糖尿病周围神经病变的发病机制研究 |
| 2 糖尿病周围神经病变的治疗概况 |
| 定量构效关系与化学空间网络、网络药理学的研究进展 |
| 1 定量构效关系的研究进展 |
| 2 化学空间网络的研究进展 |
| 3 网络药理学的研究进展 |
| 4 小结 |
| 第一部分 六味络痹颗粒的处方来源及对斑马鱼外周运动神经的影响 |
| 前言 |
| 1 六味络痹颗粒的处方来源、组成和中医理论分析 |
| 1.1 处方来源 |
| 1.2 组成 |
| 1.3 中医理论分析 |
| 2 六味络痹颗粒对斑马鱼模型外周运动神经的影响 |
| 2.1 六味络痹颗粒的耐受浓度的确定 |
| 2.2 六味络痹颗粒对斑马鱼外周运动神经的保护作用 |
| 2.3 六味络痹颗粒对斑马鱼外周运动神经的炎症消退作用 |
| 3 六味络痹颗粒改善2型糖尿病周围神经病变的临床医案 |
| 小结 |
| 第二部分 六味络痹颗粒作用于db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的药效学研究 . |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计分析方法 |
| 结果 |
| 1 对小鼠空腹血糖的影响 |
| 2 对小鼠体重的影响 |
| 3 对小鼠后肢机械痛阈值的影响 |
| 4 对坐骨神经传导速度和感觉传导速度的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的代谢组学研究 |
| 前言 |
| 1 六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的非靶向代谢组学研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 2 六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的靶向代谢组学研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 数据的统计与分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第四部分 六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的靶效空间研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 数据来源 |
| 2 靶点网络构建 |
| 3 靶点网络模块的划分 |
| 4 模块中靶点拓扑描述符的计算 |
| 5 特异性靶点的筛选 |
| 6 计算多靶点组合(模块)对疗效的权重因子 |
| 7 靶效模型的建立 |
| 8 靶效模型的验证 |
| 结果 |
| 1 靶点网络的构建 |
| 2 靶点网络模块的划分 |
| 3 拓扑描述符的计算 |
| 4 特异性靶点的筛选 |
| 5 多靶点组合(模块)对疗效的权重因子 |
| 6 WFS分数 |
| 7 WFS模型的验证 |
| 讨论 |
| 1 靶点的确定 |
| 2 靶点网络的构建 |
| 3 拓扑描述符的计算 |
| 4 特异性靶点的筛选 |
| 5 WFS分数的比较 |
| 6 WFS模型的验证 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 研究的局限性和展望 |
| 附件 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）MicroRNA-21促进糖尿病角膜上皮修复及神经再生的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验设备与仪器 |
| 1.3 实验试剂与耗材 |
| 1.3.1 主要实验药物 |
| 1.3.2 主要实验试剂与一次性耗材 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 WT与miR-21 KO小鼠鉴定 |
| 2.2 I型糖尿病小鼠模型的建立 |
| 2.3 小鼠角膜上皮损伤修复模型的建立 |
| 2.4 小鼠全角膜铺片神经染色 |
| 2.5 TUNEL免疫荧光染色 |
| 2.5.1 小鼠三叉神经节和眼球组织的TUNEL染色 |
| 2.5.2 小鼠原代三叉神经节细胞的TUNEL染色 |
| 2.6 RNA提取及反转录 |
| 2.6.1 引物序列 |
| 2.6.2 总RNA的提取 |
| 2.6.3 反转录cDNA |
| 2.6.4 RT-PCR反应 |
| 2.7 小鼠原代三叉神经节细胞的培养和处理 |
| 2.7.1 原代三叉神经节细胞的培养 |
| 2.7.2 原代三叉神经节细胞的处理 |
| 2.8 小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)细胞的培养和处理 |
| 2.8.1 TKE2 细胞的培养 |
| 2.8.2 TKE2 细胞的分组和处理 |
| 2.9 细胞免疫荧光 |
| 2.10 mRNA转录组学分析 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 MiR-21 在糖尿病角膜上皮及三叉神经节中的表达 |
| 1.1 MiR-21 在糖尿病角膜上皮中的表达升高 |
| 1.2 MiR-21在糖尿病小鼠三叉神经节中的表达升高 |
| 1.3 MiR-21在角膜上皮损伤后表达升高,但是在糖尿病小鼠中的升高幅度低于正常小鼠 |
| 2 MiR-21 在糖尿病角膜病变中的作用 |
| 2.1 WT和 miR-21 KO糖尿病小鼠血糖及体重无明显差异 |
| 2.2 MiR-21 敲除抑制糖尿病小鼠角膜上皮损伤后的上皮修复及神经再生 |
| 2.3 MiR-21 敲除抑制糖尿病小鼠角膜神经生长 |
| 3 MiR-21 在糖尿病角膜病变中发挥的作用 |
| 3.1 MiR-21 改善高糖抑制的TKE2 细胞迁移 |
| 3.2 MiR-21 改善高糖诱导的TKE2 细胞凋亡 |
| 3.3 MiR-21 促进高糖环境下三叉神经节细胞轴突的生长 |
| 3.4 MiR-21 改善高糖环境下三叉神经节细胞的凋亡 |
| 3.5 MiR-21 敲除促进糖尿病小鼠角膜上皮及三叉神经节组织的凋亡 |
| 3.6 WT和 miR-21 KO糖尿病小鼠角膜上皮及三叉神经节组织mRNA转录组学分析 |
| 4.升高miR-21对糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复及神经再生的影响 |
| 4.1 升高miR-21 促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复及神经再生 |
| 4.2 升高miR-21 抑制糖尿病小鼠角膜上皮组织和三叉神经节组织的凋亡 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 miRNA与糖尿病性角膜病变研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（4）加味补阳还五汤治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变疗效观察及对IGF-1的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1.糖尿病周围神经病变现代医学研究进展 |
| 1.1 糖尿病周围神经病变临床表现,病理改变和治疗 |
| 1.2 IGF-1在糖尿病周围神经病变中的作用 |
| 2.糖尿病周围神经病变的祖国医学研究进展 |
| 2.1 病因病机的认识 |
| 2.2 糖尿病周围神经病变证型分析 |
| 2.3 糖尿病周围神经病变的中医药治疗 |
| 临床研究 |
| 1.资料和方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 病例选择 |
| 1.3 病例纳入标准 |
| 1.4 病例排除标准 |
| 1.5 剔除病例标准 |
| 1.6 脱落病例标准 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 基础治疗 |
| 2.2 分组治疗 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 疗效判定标准 |
| 3.使用仪器 |
| 4.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.患者一般资料比较 |
| 2.治疗前后血糖及糖化血红蛋白比较 |
| 3.治疗前血脂比较 |
| 4.中医证候积分比较 |
| 5.治疗前后中医单症状积分比较 |
| 6.中医证候疗效比较 |
| 7.治疗前后MDNS评分比较 |
| 8.治疗前后患者血清IGF-1 比较 |
| 9.血清IGF-1 水平与MDNS评分相关性分析 |
| 10.安全性评价 |
| 讨论 |
| 1.立题依据及意义 |
| 2.加味补阳还五汤的组方分析和现代药理学研究进展 |
| 3.IGF-1的作用 |
| 4.观察疗效分析 |
| 4.1 对中医证候的影响 |
| 4.2 对MDNS评分的影响 |
| 4.3 对IGF-1的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）糖络宁对高糖培养下大鼠背根神经元中miR-211及IRE1α-CHOP通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 综述 |
| 综述1 糖尿病周围神经病变的中西医认识 |
| 一. 中医认识 |
| 二. 西医认识 |
| 三. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述2 microRNA对糖尿病慢性并发症影响 |
| 一. miRNA |
| 二. miRNA与糖尿病慢性并发症 |
| 三. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验用药 |
| 3. 仪器 |
| 4. 试剂 |
| 方法 |
| 1. 糖络宁含药血清及正常大鼠血清的制备 |
| 2. 大鼠DRGn细胞的分离培养 |
| 3. 干预分组 |
| 4. 细胞转染 |
| 5. q-PCR法检测miR-211及IRE1α-CHOP通路相关基因表达水平 |
| 6. Western Blot法检测IRE1α-CHOP通路相关蛋白的表达水平 |
| 7. 氧化指标的检测 |
| 8.数据分析 |
| 结果 |
| 1. DRGn细胞生长情况 |
| 2. 糖络宁对DRGn细胞miR-211及IRE1α-CHOP通路相关基因表达的影响 |
| 3. 糖络宁对DRGn细胞IRE1α-CHOP通路相关蛋白表达的影响 |
| 4. 糖络宁对DRGn细胞氧化应激水平的影响 |
| 讨论 |
| 1. miR-211在疾病中的作用 |
| 2. 氧化应激与DPN |
| 3. 内质网应激与DPN |
| 4. miR-211与内质网应激、氧化应激 |
| 5. 糖络宁对内质网应激和氧化应激的作用 |
| 6. 问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）姜黄素对高糖诱导的RSC96细胞炎症反应的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 祖国医学对DPN的认识 |
| 2 现代医学对DPN的认识 |
| 3 姜黄素的神经保护作用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 糖尿病周围神经病变中线粒体途径凋亡机制及相关通路研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
（7）糖尿病勃起功能障碍的实验与临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 糖尿病ED阴茎组织损害机制及潜在治疗措施探讨 |
| 引言 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第二章 NGF对糖尿病损伤小鼠LC保护作用的研究 |
| 第一节 糖尿病损伤小鼠LC模型的建立及NGF对细胞活力的保护 |
| 第二节 NGF对MGO损伤TM3细胞MMP的保护 |
| 第三节 NGF上调TM3细胞的StAR和CYP11A1的表达 |
| 第三章 NGF治疗DED的临床观察 |
| 引言 |
| 1. 患者募集 |
| 2. 临床试验由广州医科大学医学伦理委员会批准 |
| 3. 募集患者资料收集 |
| 4. 知情同意书（模版) |
| 5. 研宄方法 |
| 6. 结果 |
| 7. 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录1 临床研究伦理材料 |
| 附录2 参与者的基线特征调查表 |
| 附录3 知情同意书（模版） |
| 附录4 缩略词简表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（8）基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述1 糖尿病周围神经病变的中医认识 |
| 1. 病名认识 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述2 microRNA在糖尿病慢性并发症中的研究进展 |
| 1. miRNA |
| 2. miRNA与糖尿病慢性并发症 |
| 3. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验用药 |
| 3. 主要仪器设备 |
| 4. 主要试剂 |
| 方法 |
| 1. 糖络宁含药血清及正常大鼠血清的制备 |
| 2. 大鼠DRGn细胞的分离培养 |
| 3. DRGn细胞的NSE免疫荧光鉴定 |
| 4. CCK-8法测定DRGn细胞活性 |
| 5. 分组及培养基的配置 |
| 6. 氧化应激水平的测定 |
| 7. 实时荧光定量PCR技术检测miR-200a mRNA、PI3K mRNA的表达水平 |
| 8. Western blot技术检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的表达水平 |
| 9. 统计学方法 |
| 结果 |
| 1. DRGn细胞生长情况 |
| 2. DRGn细胞NSE免疫荧光鉴定 |
| 3. 不同浓度葡萄糖及糖络宁含药血清对DRGn细胞活性的影响 |
| 4. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞氧化应激水平的影响 |
| 5. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中miR-200a mRNA、PI3K mRNA表达水平的影响 |
| 6. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响 |
| 讨论 |
| 1. 氧化应激机制在DPN中的作用 |
| 2. 糖络宁对氧化应激的影响 |
| 3. miR-200家族在DPN中的作用 |
| 4. 糖络宁对PI3K/AKT信号通路的调控 |
| 5. 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）穿山龙提取物薯蓣皂苷对PDPN小鼠坐骨神经JAK/STAT信号通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 消渴痹证的中医治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）中药筋脉通对糖尿病大鼠的髓鞘保护作用及其对肠道菌群的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经的髓鞘保护作用 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 中药筋脉通对糖尿病周围神经病变大鼠肠道菌群的影响 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述1 中药筋脉通防治糖尿病周围神经病变的中医理论基础与现代药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2 基于肠道菌群调节作用的糖尿病中医药干丽究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
四、THE ROLE OF IGF-1 GENE EXPRESSION ABNORMALITY IN PATHOGENESIS OF DIABETIC PERIPHERAL NEUROPATHY（论文参考文献）
- [1]六味络痹颗粒改善db/db小鼠2型糖尿病周围神经病变的靶效代谢组学研究[D]. 刘琼. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]MicroRNA-21促进糖尿病角膜上皮修复及神经再生的研究[D]. 冯莉娟. 青岛大学, 2021(02)
- [4]加味补阳还五汤治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变疗效观察及对IGF-1的影响[D]. 宁瑞卓. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [5]糖络宁对高糖培养下大鼠背根神经元中miR-211及IRE1α-CHOP通路的影响[D]. 贾晓颖. 北京中医药大学, 2021(08)
- [6]姜黄素对高糖诱导的RSC96细胞炎症反应的影响及其机制研究[D]. 李欣. 湖北民族大学, 2021(12)
- [7]糖尿病勃起功能障碍的实验与临床研究[D]. 吴一行. 南方医科大学, 2020(06)
- [8]基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制[D]. 刘琴. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]穿山龙提取物薯蓣皂苷对PDPN小鼠坐骨神经JAK/STAT信号通路的影响[D]. 李建. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [10]中药筋脉通对糖尿病大鼠的髓鞘保护作用及其对肠道菌群的影响[D]. 谢骏. 北京协和医学院, 2020(05)
标签：糖尿病论文; 糖尿病周围神经病变论文; 血清蛋白论文; 基因表达论文; igf-1论文;